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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒单酶切出现两条带
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bla2009

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒单酶切出现两条带

我的质粒是pGBKT7, 上面有EcoRI, BamHI,两个酶切位点，我分别单酶切，却跑出了两条带；另外这两个酶切位点是挨着的，中间只隔了几个碱基，可是我用这两个酶进行双酶切，却也跑出了两条带，这是怎么回事啊，高手请赐教。
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等笨笨
1楼 2011-04-29 16:04:03
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-04-30 09:12:32
前几楼说得有道理，酶切不完全话，就会出现单链、超螺旋，甚至开环的带。
不知你的质粒是否连了外源片段，连了的话也要检查下它的酶切位点。
双酶切一定要注意，不能选用离得太近的两个酶切位点，因为酶需要一定的空间，离得太近了切不好。一般要隔10多个bp以上。
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7楼2011-04-29 23:46:53
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liby

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:42:11
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:35:21
是不是根本没有切开，
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2楼2011-04-29 17:12:31
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bla2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liby at 2011-04-29 17:12:31:
是不是根本没有切开，

应该不会啊，因为有时候条带正常，有时候又不正常
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等笨笨
3楼2011-04-29 18:02:18
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:41:55
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:35:43
同时用两种酶酶切时应该控制好两种酶的最适合pH，否则酶切会不完全的。或则分别酶切。
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无完人！
4楼2011-04-29 19:03:36
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查看全部 19 个回答
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