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铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒单酶切出现两条带

我的质粒是pGBKT7, 上面有EcoRI, BamHI,两个酶切位点，我分别单酶切，却跑出了两条带；另外这两个酶切位点是挨着的，中间只隔了几个碱基，可是我用这两个酶进行双酶切，却也跑出了两条带，这是怎么回事啊，高手请赐教。

等笨笨

1楼 2011-04-29 16:04:03

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荣誉版主 (知名作家)

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dhd997(金币+5): good 2011-04-30 09:12:32

前几楼说得有道理，酶切不完全话，就会出现单链、超螺旋，甚至开环的带。
不知你的质粒是否连了外源片段，连了的话也要检查下它的酶切位点。
双酶切一定要注意，不能选用离得太近的两个酶切位点，因为酶需要一定的空间，离得太近了切不好。一般要隔10多个bp以上。

7楼2011-04-29 23:46:53

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