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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒单酶切出现两条带
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bla2009

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒单酶切出现两条带

我的质粒是pGBKT7, 上面有EcoRI, BamHI,两个酶切位点，我分别单酶切，却跑出了两条带；另外这两个酶切位点是挨着的，中间只隔了几个碱基，可是我用这两个酶进行双酶切，却也跑出了两条带，这是怎么回事啊，高手请赐教。
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等笨笨
1楼 2011-04-29 16:04:03
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xiaoweiwei121

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dhd997(金币+6, EPI+1): 非常专业，非常辛苦，非常热心！ 2011-04-30 09:13:17
你贴出电泳图把，不然啥也说明不了
给你做了个质粒图谱，以后你最好把你的图谱也弄出来

从上边可以看出，这两个酶都是只有一个单一的酶切位点
酶切不完全的可能性很大
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8楼2011-04-30 04:36:43
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xiaoweiwei121

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不过说实话，EcoRI, BamHI,这两个酶这么强大，说他们不完全酶切，我都不大相信
呵呵，贴图之后再说
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9楼2011-04-30 04:44:48
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xiaoweiwei121

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bla2009(金币+3): 2011-04-30 22:58:47
dhd997(金币+3): 欢迎交流哦 2011-05-03 13:29:53
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:36:05
那个5
偶也搞不明白
其他的bamhi 切的 应该是切开了 只看到一条带
不知道你质粒抽提用的什么方法，我以前也遇到过，不过我用试剂盒抽提之后，这种情况就没有了
如果两个酶离得很近的话，建议不要双酶切了，用bamhi 切 然后回收 再用EcorI 切 再纯化
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12楼2011-04-30 22:37:25
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xiaoweiwei121

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引用回帖:
Originally posted by bla2009 at 2011-04-30 23:00:56:
我是用试剂盒提的质粒啊，不知道为什么会出现这样的情况。两个酶分开切的话，到最后载体的片段会不会太稀了？

只要你的质粒浓度够大的话 第一步切得多一点
浓度不是问题
我就是这么弄的
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14楼2011-04-30 23:04:34
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