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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒单酶切出现两条带
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bla2009

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒单酶切出现两条带

我的质粒是pGBKT7, 上面有EcoRI, BamHI,两个酶切位点，我分别单酶切，却跑出了两条带；另外这两个酶切位点是挨着的，中间只隔了几个碱基，可是我用这两个酶进行双酶切，却也跑出了两条带，这是怎么回事啊，高手请赐教。
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等笨笨
1楼 2011-04-29 16:04:03
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
bla2009(金币+3): 2011-04-30 22:58:47
dhd997(金币+3): 欢迎交流哦 2011-05-03 13:29:53
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:36:05
那个5
偶也搞不明白
其他的bamhi 切的 应该是切开了 只看到一条带
不知道你质粒抽提用的什么方法，我以前也遇到过，不过我用试剂盒抽提之后，这种情况就没有了
如果两个酶离得很近的话，建议不要双酶切了，用bamhi 切 然后回收 再用EcorI 切 再纯化
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12楼2011-04-30 22:37:25
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liby

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:42:11
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:35:21
是不是根本没有切开，
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2楼2011-04-29 17:12:31
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bla2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liby at 2011-04-29 17:12:31:
是不是根本没有切开，

应该不会啊，因为有时候条带正常，有时候又不正常
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等笨笨
3楼2011-04-29 18:02:18
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:41:55
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:35:43
同时用两种酶酶切时应该控制好两种酶的最适合pH，否则酶切会不完全的。或则分别酶切。
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无完人！
4楼2011-04-29 19:03:36
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