24小时热门版块排行榜    

查看: 4252  |  回复: 15
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

[交流] 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。

昨日看见某帖子说关于验证重组载体,楼下有位朋友说用快检的方法可以迅速检测出来。。。

这是该朋友的回帖的原内容:
快检就是直接用摇起的菌液取100uL,加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心,
取上清跑胶,对照上个空载体,就是没有连片段前的质粒(环合的哈),
或者和你载体差不多大小的质粒也可,一般连进去的重组质粒会跑得慢点,
凭这个就能鉴定哪些连进去了,然后再提质粒酶切就好了

因为我们实验室就是一般的PCR,酶切质粒来验证,快检没有做过,所以我想问问大家具体的方法是什么?原理又是怎样?谢谢了!
苯酚和氯仿的作用是什么呢?

谢谢了。。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
都有人做过吗?效果怎样?靠得住吗?
16楼2013-10-25 00:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

xuguanghai

木虫 (职业作家)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
天使托(金币+1): 原理是什么呢? 2011-04-29 11:24:39
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-29 10:45:38:
昨日看见某帖子说关于验证重组载体,楼下有位朋友说用快检的方法可以迅速检测出来。。。

这是该朋友的回帖的原内容:
快检就是直接用摇起的菌液取100uL,加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心,
取上清跑胶,对 ...

直接用摇起的菌液取100uL,加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心

这一步就是粗提质粒吧,然后跑胶对比质粒大小?
我是这么理解的

不过我们实验室一般是要酶切验证的,这个对构建前后质粒差别较大的才有用
3楼2011-04-29 11:08:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小_木虫

木虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
以前听一个师兄好像说过快速提质粒的方法,和这个快检差不多,但是没有细问,期待大家的答案。
4楼2011-04-29 11:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-04-29 11:08:43:
直接用摇起的菌液取100uL,加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心

这一步就是粗提质粒吧,然后跑胶对比质粒大小?
我是这么理解的

不过我们实验室一般是要酶切验证的,这个对构建前后质粒差别较大的才有用

这是一个不严谨的判断吧,就是比较质粒大小
6楼2011-04-29 11:37:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +10 Kittylucky 2026-08-27 10/500 2026-08-28 07:10 by sincosx
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 3/150 2026-08-28 00:49 by 3RAFyYXYSwGS
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
请填处理意见