24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

[交流] 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。

昨日看见某帖子说关于验证重组载体，楼下有位朋友说用快检的方法可以迅速检测出来。。。

这是该朋友的回帖的原内容：
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，
取上清跑胶，对照上个空载体，就是没有连片段前的质粒（环合的哈），
或者和你载体差不多大小的质粒也可，一般连进去的重组质粒会跑得慢点，
凭这个就能鉴定哪些连进去了，然后再提质粒酶切就好了

因为我们实验室就是一般的PCR，酶切质粒来验证，快检没有做过，所以我想问问大家具体的方法是什么？原理又是怎样？谢谢了！
苯酚和氯仿的作用是什么呢？

谢谢了。。。。。

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

有没有搭界面结构的软件之类的？已经有3人回复
有机分子能级与衬底能隙位置对应的问题已经有3人回复
重组质粒双酶切问题已经有5人回复
pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？已经有12人回复
求助：用pXMJ19构建的重组质粒在谷氨酸棒杆菌不表达，应该如何解决？已经有6人回复
求助：关于重组质粒目的条带丢失已经有9人回复
【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下已经有4人回复
【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～已经有16人回复
【求助/交流】转有空质粒的菌跟转有目的基因的重组质粒的菌哪个生长快？已经有3人回复
【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！已经有11人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-04-29 10:45:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 2841.2
帖子: 3072
在线: 296.7小时
虫号: 449061

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

Originally posted by xuguanghai at 2011-04-29 11:08:43:
直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心

这一步就是粗提质粒吧，然后跑胶对比质粒大小？
我是这么理解的

不过我们实验室一般是要酶切验证的，这个对构建前后质粒差别较大的才有用

这是一个不严谨的判断吧，就是比较质粒大小

赞一下(1人)

回复此楼

6楼2011-04-29 11:37:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 16 个回答

xuguanghai

木虫 (职业作家)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 2841.2
帖子: 3072
在线: 296.7小时
虫号: 449061

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
天使托(金币+1): 原理是什么呢？ 2011-04-29 11:24:39

引用回帖:

Originally posted by 天使托 at 2011-04-29 10:45:38:
昨日看见某帖子说关于验证重组载体，楼下有位朋友说用快检的方法可以迅速检测出来。。。

这是该朋友的回帖的原内容：
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，
取上清跑胶，对 ...

直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心

这一步就是粗提质粒吧，然后跑胶对比质粒大小？
我是这么理解的

不过我们实验室一般是要酶切验证的，这个对构建前后质粒差别较大的才有用

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2011-04-29 11:08:43

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖