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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
天使托(金币+3): 谢谢了。。。。很好很强大！ 2011-04-29 12:25:46
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-04-30 09:16:11
快检就是直接比较质粒大小
用酚氯仿破菌后，离心后DNA和RNA都在上层水相里，
跑胶一般情况下能看见五条带，最上面是大肠杆菌的总DNA，第二条就是你的超螺旋的质粒，下面三条小的就是RNA，连进去的重组质粒和你的空载体大小有差别，大的跑胶跑得慢，空载体跑得快，电泳一看就一目了然了
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7楼2011-04-29 11:53:18
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 感谢分享！我们实验室没有用特殊的缓冲液，就苯酚氯仿，用得一直也不错呢。 2011-05-16 16:43:37
引用回帖:
Originally posted by proteinwang at 2011-05-04 14:37:39:
您好！您介绍的方法比较靠谱，能不能把快速裂解液的配方给大家共享一下？
谢谢了，估计很多人在期待呢！

不好意思，我今天才看到你的回复。快速裂解液的配方：
50mmol/L  Tris-HCl  （pH6.8）
1%   SDS  
2mmol/L   EDTA
400mmol/L  蔗糖
0.01%   溴酚蓝   
如果在使用过程中发现细胞裂解太严重，就是离心取上清时发现蛋白沉淀黏黏糊糊那就把SDS的量降低点。你可以先把其他的药品配好，取出一部分来加入不同的SDS试一试，我配过两次有一次比较好用，另外一次就发现SDS可能太多了，可能不同公司的SDS质量也不太一样造成的吧。
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12楼2011-05-16 10:38:16
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