应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。
51/1返回列表
查看: 4337  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

[交流] 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。

昨日看见某帖子说关于验证重组载体，楼下有位朋友说用快检的方法可以迅速检测出来。。。

这是该朋友的回帖的原内容：
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，
取上清跑胶，对照上个空载体，就是没有连片段前的质粒（环合的哈），
或者和你载体差不多大小的质粒也可，一般连进去的重组质粒会跑得慢点，
凭这个就能鉴定哪些连进去了，然后再提质粒酶切就好了

因为我们实验室就是一般的PCR，酶切质粒来验证，快检没有做过，所以我想问问大家具体的方法是什么？原理又是怎样？谢谢了！
苯酚和氯仿的作用是什么呢？

谢谢了。。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-29 10:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

proteinwang

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-04-30 08:57:13:
我们实验室也在用这个方法，PCR验证假阳性率比较高，如果挑的转化子比较多，提质粒不仅费时费力，还浪费试剂盒。实验室一个师兄按照分子生物学手册上的配方配了一个快速裂解液，好像有甘油，溴酚蓝，SDS之类的。转 ...

您好！您介绍的方法比较靠谱，能不能把快速裂解液的配方给大家共享一下？
谢谢了，估计很多人在期待呢！
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-05-04 14:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
天使托(金币+1): 原理是什么呢？ 2011-04-29 11:24:39
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-29 10:45:38:
昨日看见某帖子说关于验证重组载体，楼下有位朋友说用快检的方法可以迅速检测出来。。。

这是该朋友的回帖的原内容：
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，
取上清跑胶，对 ...

直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心

这一步就是粗提质粒吧，然后跑胶对比质粒大小？
我是这么理解的

不过我们实验室一般是要酶切验证的，这个对构建前后质粒差别较大的才有用
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-29 11:08:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小_木虫

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
以前听一个师兄好像说过快速提质粒的方法，和这个快检差不多，但是没有细问，期待大家的答案。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-29 11:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-04-29 11:08:43:
直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心

这一步就是粗提质粒吧，然后跑胶对比质粒大小？
我是这么理解的

不过我们实验室一般是要酶切验证的，这个对构建前后质粒差别较大的才有用

这是一个不严谨的判断吧，就是比较质粒大小
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-04-29 11:37:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭