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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取中的假阳性

最近做质粒提取,从转化后的含有Amp的平板上挑去单菌落,接种到含有AMP的YT液体培养液中,摇菌看到很浑浊,但是看不到别人所说的有大量的絮状漂浮物,接着按照碱裂解法提取质粒,结果没有条带,不知道为什么?是菌没有培养好,还是挑去的菌落是假阳性?该怎样做才能避免这种情况呢?
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wkl1984(金币+2): 2011-04-20 10:18:18
reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-20 11:22:25
1.菌液浑浊即可,没有必要出现什么漂浮物,那样是摇菌过久或者该菌生长力过强的表现,抗生素可能已经失效。
2.没有质粒的话,排除你试剂盒以及操作的问题,应该是没转化成功,再做转化一次效率会比较高一点。
3.保证感受态的效率以及目的片段的浓度是成功的关键
好运
2楼2011-04-20 09:51:08
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119xu119

铜虫 (初入文坛)

含有大量的絮状漂浮物是正常的么?浑浊即可
3楼2011-04-20 11:16:15
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