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阿叉

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶提取液的问题

以下是我的操作步骤：
      取藻液3ml，4℃、10 000 r/min冷冻离心10min，弃上清液，称量其质量，加4.0ml磷酸缓冲溶液（0.05mol/L，PH7.0）在冰浴下超声破碎（400w，超声10s间隔10s,操作10分钟)接着在4℃下以8000 r/min冷冻离心20分钟，此上清液为酶提取。

   然后用该酶提取液去做POD酶活性实验，可是一点反应也没有，没任何颜色变化啊，  求高手指导 我错在哪了，是酶提取液的问题？

我用冰浴研磨的，可是一点酶活性也测不出来 ，我用冰浴超声波破碎的，也没有一点酶活性，但是研磨的也测不出蛋白质，超声的可以测出蛋白质，请问大侠这是什么情况了，会不是藻太少的缘故？

还有就是测蛋白质的酶粗液研磨的时候 温度对蛋白质的影响大吗？研磨用的磷酸缓冲液PH 对蛋白质的影响大吗

还有就是高速离心怎么有时离心效果好，有时离心效果不好，高速离心机是好的啊

[ Last edited by 阿叉 on 2011-4-14 at 19:38 ]
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1楼 2011-04-13 21:28:47
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kobe8md1

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
阿叉(金币+1):谢谢参与
咸鱼(金币+2): 谢谢回帖~ 2011-04-15 14:16:12
你第一步离心后  海藻的沉淀有多少？  是不是太少了   加2ml磷缓试试   或者在显色时多加酶液   再看看你是药品有没有问题
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2楼2011-04-15 12:35:37
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by kobe8md1 at 2011-04-15 12:35:37:
你第一步离心后  海藻的沉淀有多少？  是不是太少了   加2ml磷缓试试   或者在显色时多加酶液   再看看你是药品有没有问题

药品应该没有问题，我今天摘了路上几个树叶，用研磨能测出POD来，
同样树叶，研磨后再超声破碎却不能测出POD 来，很费解啊

对于我要做的藻，是斜生栅藻，不论是研磨还是超声破碎还是研磨加超声破碎都不能测出POD来，

大侠我该怎么办，是量太少了吗？如果是的话，差不多要多少，您能给个让我有数的量吗（其实我感觉不是量的问题，因为感觉哪怕一点点也能有一点点颜色变化啊 ）
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3楼2011-04-15 20:38:21
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fangxi010

禁虫 (小有名气)
★ ★
阿叉(金币+1):谢谢参与
jhu132llh(金币+1): 活跃 2011-05-19 08:44:33
本帖内容被屏蔽
4楼2011-05-18 15:48:31
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6041

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
阿叉(金币+1): 谢谢参与
jhu132llh: 金币+2, 鼓励积极交流 2012-04-16 21:21:04
温度对酶活性有影响……超声产热大，有可能让酶失活，但是你研磨测不出活性，超声却测出了活性，这个很诡异……不知道楼主找到原因了吗？
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5楼2012-04-15 15:26:12
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num20062622

银虫 (正式写手)
★
阿叉(金币+1): 谢谢参与
我的POD也有问题...
我测得是6min的酶活变化..
我的pod变色很慢 前5分钟吸光度基本不变化
到最后一分钟才稍微有些变化..
我很郁闷...

楼主你周围有人遇到这样的情况么 可以告知下是怎么操作的么?
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6楼2012-12-23 14:12:48
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