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【求助/交流】酶提取液的问题
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以下是我的操作步骤： 取藻液3ml，4℃、10 000 r/min冷冻离心10min，弃上清液，称量其质量，加4.0ml磷酸缓冲溶液（0.05mol/L，PH7.0）在冰浴下超声破碎（400w，超声10s间隔10s,操作10分钟)接着在4℃下以8000 r/min冷冻离心20分钟，此上清液为酶提取。 然后用该酶提取液去做POD酶活性实验，可是一点反应也没有，没任何颜色变化啊， 求高手指导 我错在哪了，是酶提取液的问题？ 我用冰浴研磨的，可是一点酶活性也测不出来 ，我用冰浴超声波破碎的，也没有一点酶活性，但是研磨的也测不出蛋白质，超声的可以测出蛋白质，请问大侠这是什么情况了，会不是藻太少的缘故？ 还有就是测蛋白质的酶粗液研磨的时候 温度对蛋白质的影响大吗？研磨用的磷酸缓冲液PH 对蛋白质的影响大吗 还有就是高速离心怎么有时离心效果好，有时离心效果不好，高速离心机是好的啊 [ Last edited by 阿叉 on 2011-4-14 at 19:38 ] |
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