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阿叉

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】酶提取液的问题

以下是我的操作步骤：
取藻液3ml，4℃、10 000 r/min冷冻离心10min，弃上清液，称量其质量，加4.0ml磷酸缓冲溶液（0.05mol/L，PH7.0）在冰浴下超声破碎（400w，超声10s间隔10s,操作10分钟)接着在4℃下以8000 r/min冷冻离心20分钟，此上清液为酶提取。

然后用该酶提取液去做POD酶活性实验，可是一点反应也没有，没任何颜色变化啊，求高手指导我错在哪了，是酶提取液的问题？

我用冰浴研磨的，可是一点酶活性也测不出来，我用冰浴超声波破碎的，也没有一点酶活性，但是研磨的也测不出蛋白质，超声的可以测出蛋白质，请问大侠这是什么情况了，会不是藻太少的缘故？

还有就是测蛋白质的酶粗液研磨的时候温度对蛋白质的影响大吗？研磨用的磷酸缓冲液PH 对蛋白质的影响大吗

还有就是高速离心怎么有时离心效果好，有时离心效果不好，高速离心机是好的啊

[ Last edited by 阿叉 on 2011-4-14 at 19:38 ]

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1楼2011-04-13 21:28:47

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阿叉

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引用回帖:

Originally posted by kobe8md1 at 2011-04-15 12:35:37:
你第一步离心后海藻的沉淀有多少？是不是太少了加2ml磷缓试试或者在显色时多加酶液再看看你是药品有没有问题

药品应该没有问题，我今天摘了路上几个树叶，用研磨能测出POD来，
同样树叶，研磨后再超声破碎却不能测出POD 来，很费解啊

对于我要做的藻，是斜生栅藻，不论是研磨还是超声破碎还是研磨加超声破碎都不能测出POD来，

大侠我该怎么办，是量太少了吗？如果是的话，差不多要多少，您能给个让我有数的量吗（其实我感觉不是量的问题，因为感觉哪怕一点点也能有一点点颜色变化啊）