24小时热门版块排行榜

返回列表

阿叉

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 192.7
帖子: 134
在线: 17.5小时
虫号: 852993

[交流] 【求助/交流】酶提取液的问题

以下是我的操作步骤：
取藻液3ml，4℃、10 000 r/min冷冻离心10min，弃上清液，称量其质量，加4.0ml磷酸缓冲溶液（0.05mol/L，PH7.0）在冰浴下超声破碎（400w，超声10s间隔10s,操作10分钟)接着在4℃下以8000 r/min冷冻离心20分钟，此上清液为酶提取。

然后用该酶提取液去做POD酶活性实验，可是一点反应也没有，没任何颜色变化啊，求高手指导我错在哪了，是酶提取液的问题？

我用冰浴研磨的，可是一点酶活性也测不出来，我用冰浴超声波破碎的，也没有一点酶活性，但是研磨的也测不出蛋白质，超声的可以测出蛋白质，请问大侠这是什么情况了，会不是藻太少的缘故？

还有就是测蛋白质的酶粗液研磨的时候温度对蛋白质的影响大吗？研磨用的磷酸缓冲液PH 对蛋白质的影响大吗

还有就是高速离心怎么有时离心效果好，有时离心效果不好，高速离心机是好的啊

[ Last edited by 阿叉 on 2011-4-14 at 19:38 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

怎么查看固定段11位已经有5人回复
可以准确的通过filecode判断基金中还是不中。已经有15人回复
植物学论文润色/翻译怎么收费? 已经有166人回复
感觉普通人已经没办法玩了，躺平是唯一的出路。已经有26人回复
江苏省优青门槛已经有20人回复
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了已经有10人回复
面上项目计划书已经有7人回复
面上项目计划书附件已经有9人回复
面上项目计划书系统状态已经有18人回复
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目已经有33人回复
和伊朗人合作已经有32人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

酶活性测定已经有16人回复
CTAB 基因提取方法的问题已经有10人回复
求助微生物琥珀酸脱氢酶测定问题已经有11人回复
关于测定笋的多酚氧化酶PPO活性的问题已经有14人回复
关于植物生理生化试验的n个问题已经有23人回复
16srDNA扩增问题，急已经有18人回复
植物鲜样及酶提取液的保存已经有8人回复
【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！已经有14人回复
【求助】蛋白提取率的问题已经有13人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-04-13 21:28:47

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

kobe8md1

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 15.5
帖子: 34
在线: 11.9小时
虫号: 1006035

★ ★ ★
阿叉(金币+1):谢谢参与
咸鱼(金币+2): 谢谢回帖~ 2011-04-15 14:16:12

你第一步离心后海藻的沉淀有多少？是不是太少了加2ml磷缓试试或者在显色时多加酶液再看看你是药品有没有问题

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2011-04-15 12:35:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

阿叉

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 192.7
帖子: 134
在线: 17.5小时
虫号: 852993

引用回帖:

Originally posted by kobe8md1 at 2011-04-15 12:35:37:
你第一步离心后海藻的沉淀有多少？是不是太少了加2ml磷缓试试或者在显色时多加酶液再看看你是药品有没有问题

药品应该没有问题，我今天摘了路上几个树叶，用研磨能测出POD来，
同样树叶，研磨后再超声破碎却不能测出POD 来，很费解啊

对于我要做的藻，是斜生栅藻，不论是研磨还是超声破碎还是研磨加超声破碎都不能测出POD来，

大侠我该怎么办，是量太少了吗？如果是的话，差不多要多少，您能给个让我有数的量吗（其实我感觉不是量的问题，因为感觉哪怕一点点也能有一点点颜色变化啊）

赞一下

回复此楼

3楼2011-04-15 20:38:21

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖