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mahayana

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问做蛋白质消化用考马斯亮蓝法还是福林-酚法检测好？

我想用胃蛋白酶对蛋白质进行消化，然后检测剩余蛋白质的含量。
  想问一下各位虫友用考马斯亮蓝法好还是福林-酚法好？
  蛋白质被消化成的氨基酸会不会对考马斯亮蓝法造成影响？？？
  谢谢大家啊~~~
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1楼 2011-04-13 10:30:46
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mahayana

铜虫 (小有名气)
我不知道考马斯亮蓝法可不可以这样测：
1、蛋白酶将部分蛋白质分解为氨基酸
2、用三氯乙酸把蛋白酶和蛋白质沉淀
3、离心，取上清液
3、用考马斯亮蓝法测溶液中的氨基酸含量
如果可以这样测的话，选哪种蛋白质比较好？
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6楼2011-04-13 11:26:50
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萧柏

金虫 (小有名气)
mahayana(金币+1): 谢谢关注 2011-04-20 09:09:25
不知道，但是顶一下
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2楼2011-04-13 10:36:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-13 13:24:10
mahayana(金币+1): 谢谢关注，但是我的测试液中还有剩余的蛋白质和胃蛋白酶，不会影响考马斯亮蓝的数据吗？ 2011-04-20 09:10:43
mahayana(金币+4): 2011-04-20 09:12:31
引用回帖:
Originally posted by mahayana at 2011-04-13 10:30:46:
我想用胃蛋白酶对蛋白质进行消化，然后检测剩余蛋白质的含量。
  想问一下各位虫友用考马斯亮蓝法好还是福林-酚法好？
  蛋白质被消化成的氨基酸会不会对考马斯亮蓝法造成影响？？？
  谢谢大家啊~~~

两种方法测的都是蛋白的含量，不是氨基酸，所以都能用，但是考马斯亮蓝法比福林-酚法方便、精度高。推荐使用考马斯亮蓝法。
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4楼2011-04-13 10:51:05
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mahayana

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-13 10:51:05:
两种方法测的都是蛋白的含量，不是氨基酸，所以都能用，但是考马斯亮蓝法比福林-酚法方便、精度高。推荐使用考马斯亮蓝法。

不是啊 ，福林试剂测的是氨基酸的含量。
中华人民共和国专业标准——蛋白酶活力测定法
“取15×100mm试管3支,编号1、2、3(做2只也可),每管内加入样品（蛋白酶）
稀释液1mL,置于40℃水浴中预热2min,再各加入经同样预热的酪蛋白1mL,精确保温10min, 时间到后,立即再各加入0.4mol三氯乙酸2mL,以终止反应（三氯乙酸使蛋白质变性沉淀）,继续置于水浴中保温20min,使残余蛋白质沉淀后离心或过滤,然后另取15×150mm试管3支,编号1、2、3,每管内加入滤液1mL,再加0.4mol碳酸钠5mL,已稀释的福林试剂1mL,摇匀,40℃保温发色20min后进行光密度值测定。”
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5楼2011-04-13 11:22:59
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