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【求助/交流】PCR循环问题
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| 我提取土壤DNA后， PCR建库， 我用20+40和30+30这两种循环次数，哪个结果靠谱些？说明原因！谢谢了！ |
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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-16 08:56:36
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-16 08:56:36
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(1) 从超低温冰箱中取出保存样品 (5 g)； (2) 于室温融化； (3) 加入13.5 mL CTAB 抽提缓冲液和50 μL 蛋白酶K 贮存液； (4) 离心管于37oC 225 rpm 水平振荡30 min； (5) 加入1.5 mL20%SDS； (6) 65oC 水浴2 h，每隔15 min 轻轻颠倒数次； (7) 室温6,000g 离心10 min，收集上清液，转移至一个新的50 mL 离心管中； (8) 沉淀中再加入4.5 mL 提取液和0.5 mL 20%SDS，轻轻涡旋至混匀； (9) 浸入液氮中冷冻3 min 后，于沸水中煮沸3 min； (10) 室温6,000g 离心10 min，收集上清液，与上次上清液合并； (11) 重复(8)、(9)、(10)一次； (12) 将三次提取所获上清液与等体积的苯酚：氯仿(1:1 v/v) 混合，摇匀后于4 oC 12,000g 离心10 min； (13) 将上层水相转移至一新的50 mL 离心管中，加入等体积的氯仿：异戊醇(24:1)， 混匀后于4 oC 12,000g 离心10 min； (14) 再次转移上清至一新的离心管中，加入0.6 倍体积的异丙醇于室温沉淀1 h； (15) 室温12,000g 离心20 min； (16) 收集沉淀，用预冷的70%乙醇洗涤沉淀； (17) 向离心管中加入1 mL TE，于4 oC 放置过夜，分装保存于‐20 oC。 |
8楼2011-05-15 11:01:01
天使托
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2楼2011-04-11 11:40:04
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ureyguo12楼
2011-05-16 21:33
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