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ureyguo

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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-16 08:56:36
引用回帖:
Originally posted by ureyguo at 2011-05-10 22:39:15:
zhoujizhong AEM

(1) 从超低温冰箱中取出保存样品 (5 g);
(2) 于室温融化;
(3) 加入13.5 mL CTAB 抽提缓冲液和50 μL 蛋白酶K 贮存液;
(4) 离心管于37oC 225 rpm 水平振荡30 min;
(5) 加入1.5 mL20%SDS;
(6) 65oC 水浴2 h,每隔15 min 轻轻颠倒数次;
(7) 室温6,000g 离心10 min,收集上清液,转移至一个新的50 mL 离心管中;
(8) 沉淀中再加入4.5 mL 提取液和0.5 mL 20%SDS,轻轻涡旋至混匀;
(9) 浸入液氮中冷冻3 min 后,于沸水中煮沸3 min;
(10) 室温6,000g 离心10 min,收集上清液,与上次上清液合并;
(11) 重复(8)、(9)、(10)一次;
(12) 将三次提取所获上清液与等体积的苯酚:氯仿(1:1 v/v) 混合,摇匀后于4 oC
12,000g 离心10 min;
(13) 将上层水相转移至一新的50 mL 离心管中,加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),
混匀后于4 oC 12,000g 离心10 min;
(14) 再次转移上清至一新的离心管中,加入0.6 倍体积的异丙醇于室温沉淀1 h;
(15) 室温12,000g 离心20 min;
(16) 收集沉淀,用预冷的70%乙醇洗涤沉淀;
(17) 向离心管中加入1 mL TE,于4 oC 放置过夜,分装保存于‐20 oC。
8楼2011-05-15 11:01:01
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