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dingjunrong

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下

试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,是不是偏高了，DNA纯度可以用来做后续的PCR实验吗？原因是什么？求帮忙分析~附质粒提取的电泳图
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1楼2011-03-28 15:57:06
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dingjunrong(金币+5): 2011-03-29 09:26:43
dhd997(金币+5): good。看你经常出现，很热心，想当版主吗？考虑一下？ 2011-03-30 08:18:35
dhd997(金币+5): good。看你经常出现，很热心，想当版主吗？考虑一下？ 2011-03-30 08:18:54
A260/A280的范围在1.8~2.0比较好，但这只是一般的说法，不用太纠结。
PCR对模板要求并不高。我们实验室用质粒作模板的话，只需碱裂解法手提，跑胶看到有条带就去PCR了，没见出过什么问题。
试剂盒提取的质粒纯度是有保证的，再说PCR本身也是一个很特异的反应，楼主不用担心质粒纯度问题。再说了，你提的浓度也很高。
一句话，你这质粒绝对绝对可以拿去做PCR的，1微升做模板就够了！
唠叨句，以后你再提质粒，完全没必要去测OD的。
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2楼2011-03-28 17:33:45
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dingjunrong

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-28 17:33:45:
A260/A280的范围在1.8~2.0比较好，但这只是一般的说法，不用太纠结。
PCR对模板要求并不高。我们实验室用质粒作模板的话，只需碱裂解法手提，跑胶看到有条带就去PCR了，没见出过什么问题。
试剂盒提取的质粒纯度 ...

恩~~谢谢了，因为我后面要做荧光定量PCR，所以测了下浓度，顺便测了下吸光度，谢谢了~那请问大侠是否知道怎样将质粒的浓度转化为拷贝数呢
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3楼2011-03-29 09:25:42
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by dingjunrong at 2011-03-29 09:25:42:
恩~~谢谢了，因为我后面要做荧光定量PCR，所以测了下浓度，顺便测了下吸光度，谢谢了~那请问大侠是否知道怎样将质粒的浓度转化为拷贝数呢

呵呵，汗颜了，不好意思，不知道是要做荧光定量PCR，嘿嘿~质粒是要做标准曲线吧？
绝对定量我没做过，下面是天根的荧光定量PCR培训教材里的：

质粒浓度(ng/ul)=OD260*50*稀释倍数
质粒分子量=碱基数*324
质粒拷贝数（copies/ul）=浓度/分子量*6*10^14 （10的14次方）

祝实验顺利!
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4楼2011-03-29 11:11:37
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西瓜

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补充

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-03-30 08:18:54
这里有人详细说明了拷贝数计算的原理
还附了个直接在网页上计算拷贝数的工具，可以看看
http://www.bioask.cn/html/541.html
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5楼2011-03-29 22:34:15
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