应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下
51/1返回列表
查看: 2049  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dingjunrong

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下

试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,是不是偏高了，DNA纯度可以用来做后续的PCR实验吗？原因是什么？求帮忙分析~附质粒提取的电泳图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-28 15:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingjunrong

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-28 17:33:45:
A260/A280的范围在1.8~2.0比较好，但这只是一般的说法，不用太纠结。
PCR对模板要求并不高。我们实验室用质粒作模板的话，只需碱裂解法手提，跑胶看到有条带就去PCR了，没见出过什么问题。
试剂盒提取的质粒纯度 ...

恩~~谢谢了，因为我后面要做荧光定量PCR，所以测了下浓度，顺便测了下吸光度，谢谢了~那请问大侠是否知道怎样将质粒的浓度转化为拷贝数呢
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-29 09:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dingjunrong(金币+5): 2011-03-29 09:26:43
dhd997(金币+5): good。看你经常出现，很热心，想当版主吗？考虑一下？ 2011-03-30 08:18:35
dhd997(金币+5): good。看你经常出现，很热心，想当版主吗？考虑一下？ 2011-03-30 08:18:54
A260/A280的范围在1.8~2.0比较好，但这只是一般的说法，不用太纠结。
PCR对模板要求并不高。我们实验室用质粒作模板的话，只需碱裂解法手提，跑胶看到有条带就去PCR了，没见出过什么问题。
试剂盒提取的质粒纯度是有保证的，再说PCR本身也是一个很特异的反应，楼主不用担心质粒纯度问题。再说了，你提的浓度也很高。
一句话，你这质粒绝对绝对可以拿去做PCR的，1微升做模板就够了！
唠叨句，以后你再提质粒，完全没必要去测OD的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-03-28 17:33:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by dingjunrong at 2011-03-29 09:25:42:
恩~~谢谢了，因为我后面要做荧光定量PCR，所以测了下浓度，顺便测了下吸光度，谢谢了~那请问大侠是否知道怎样将质粒的浓度转化为拷贝数呢

呵呵，汗颜了，不好意思，不知道是要做荧光定量PCR，嘿嘿~质粒是要做标准曲线吧？
绝对定量我没做过，下面是天根的荧光定量PCR培训教材里的：

质粒浓度(ng/ul)=OD260*50*稀释倍数
质粒分子量=碱基数*324
质粒拷贝数（copies/ul）=浓度/分子量*6*10^14 （10的14次方）

祝实验顺利!
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-29 11:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

补充

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-03-30 08:18:54
这里有人详细说明了拷贝数计算的原理
还附了个直接在网页上计算拷贝数的工具，可以看看
http://www.bioask.cn/html/541.html
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-29 22:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 6/300 2026-03-02 09:28 by 热情沙漠
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +7 YXCT 2026-03-01 7/350 2026-03-02 08:29 by houyaoxu
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +3 hit_aiot 2026-03-01 5/250 2026-03-02 07:48 by 得鹿梦鱼111
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +4 pin8023 2026-02-28 6/300 2026-03-02 06:35 by 汪！？！
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭