24小时热门版块排行榜    

查看: 2396  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dingjunrong

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下

试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,是不是偏高了,DNA纯度可以用来做后续的PCR实验吗?原因是什么?求帮忙分析~附质粒提取的电泳图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

补充

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-03-30 08:18:54
这里有人详细说明了拷贝数计算的原理
还附了个直接在网页上计算拷贝数的工具,可以看看
http://www.bioask.cn/html/541.html
5楼2011-03-29 22:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dingjunrong(金币+5): 2011-03-29 09:26:43
dhd997(金币+5): good。看你经常出现,很热心,想当版主吗?考虑一下? 2011-03-30 08:18:35
dhd997(金币+5): good。看你经常出现,很热心,想当版主吗?考虑一下? 2011-03-30 08:18:54
A260/A280的范围在1.8~2.0比较好,但这只是一般的说法,不用太纠结。
PCR对模板要求并不高。我们实验室用质粒作模板的话,只需碱裂解法手提,跑胶看到有条带就去PCR了,没见出过什么问题。
试剂盒提取的质粒纯度是有保证的,再说PCR本身也是一个很特异的反应,楼主不用担心质粒纯度问题。再说了,你提的浓度也很高。
一句话,你这质粒绝对绝对可以拿去做PCR的,1微升做模板就够了!
唠叨句,以后你再提质粒,完全没必要去测OD的。
2楼2011-03-28 17:33:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingjunrong

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-28 17:33:45:
A260/A280的范围在1.8~2.0比较好,但这只是一般的说法,不用太纠结。
PCR对模板要求并不高。我们实验室用质粒作模板的话,只需碱裂解法手提,跑胶看到有条带就去PCR了,没见出过什么问题。
试剂盒提取的质粒纯度 ...

恩~~谢谢了,因为我后面要做荧光定量PCR,所以测了下浓度,顺便测了下吸光度,谢谢了~那请问大侠是否知道怎样将质粒的浓度转化为拷贝数呢
3楼2011-03-29 09:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by dingjunrong at 2011-03-29 09:25:42:
恩~~谢谢了,因为我后面要做荧光定量PCR,所以测了下浓度,顺便测了下吸光度,谢谢了~那请问大侠是否知道怎样将质粒的浓度转化为拷贝数呢

呵呵,汗颜了,不好意思,不知道是要做荧光定量PCR,嘿嘿~质粒是要做标准曲线吧?
绝对定量我没做过,下面是天根的荧光定量PCR培训教材里的:

质粒浓度(ng/ul)=OD260*50*稀释倍数
质粒分子量=碱基数*324
质粒拷贝数(copies/ul)=浓度/分子量*6*10^14 (10的14次方)

祝实验顺利!
4楼2011-03-29 11:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 12/600 2026-10-13 20:40 by Merryya
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +9 Isak0320 2026-10-12 13/650 2026-10-13 11:57 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费,对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见