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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】如何调取未知基因

我有个真菌类微生物,想做基因敲除,但是没有该菌株的基因序列,只是推测有相关途径(该途径在蓝细菌里存在),想问一下大家,如何克隆出这段未知基因?非常焦急!
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)


huangdi07(金币+1): 2011-03-23 22:37:18
既然有了可能相关的序列,那可以先根据已经有的序列设计引物,尝试调出基因,再测序。
2楼2011-03-23 22:26:26
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by zhengfan1109 at 2011-03-23 22:26:26:
既然有了可能相关的序列,那可以先根据已经有的序列设计引物,尝试调出基因,再测序。

现在的情况是,只有蓝细菌里有这段序列,真菌属于真核生物,是不是设计引物时考虑密码子简并性问题啊?另外,做race能实现吗?
3楼2011-03-23 22:39:39
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


huangdi07(金币+1): 2011-03-24 08:05:26
不知道序列,知道功能的话也可以
4楼2011-03-23 22:40:59
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-03-23 22:40:59:
不知道序列,知道功能的话也可以

如何设计引物啊?两个菌一个真核的一个原核的,差异很大啊
5楼2011-03-24 08:06:27
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★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-03-24 12:49:39
huangdi07(金币+1): 谢谢 2011-03-25 11:17:40
可以参考一下蓝细菌的基因序列
做一短点的引物然后做一下BLAST验证后优化引物做一下PCR试试了
6楼2011-03-24 10:33:17
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sunwei57

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白的活性中心是保守的,寻找该蛋白的保守序列设计兼并引物
7楼2012-03-18 21:25:21
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shaquila

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用先搜索est做电子克隆,然后设计兼并引物或高同源区域设计引物啊。其实这就是最基本的同源克隆,搜索下很多的,书上也有相关知识。
8楼2012-03-18 22:37:23
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