24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

syd89522

木虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 10107.3
帖子: 154
在线: 111小时
虫号: 778712

[交流] 【求助/交流】RT-PCR最原始的做法然后描述

就是最老套的半定量PCR，被问之what tpye of RT-PCR and what conditions were used for extraction and expression of RNA probes?该如何回答呢？请教高手

回复此楼

» 猜你喜欢

拟解决的关键科学问题还要不要写已经有9人回复
救命帖已经有4人回复
限项规定已经有5人回复
为什么nbs上溴没有产物点出现呢已经有9人回复
招博士已经有3人回复
存款400万可以在学校里躺平吗已经有35人回复
最失望的一年已经有18人回复
求推荐博导已经有4人回复
求助一下有机合成大神已经有4人回复
求推荐英文EI期刊已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~ 已经有7人回复
转基因植株的RT-PCR结果分析已经有8人回复
请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除已经有18人回复
流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！已经有5人回复
向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题已经有9人回复
RT-PCR相关问题已经有5人回复
ＲＴ－ＰＣＲ问题求助已经有18人回复
【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？已经有8人回复
【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。已经有10人回复
【求助/交流】大家来讨论下RT-PCR的试剂盒吧！已经有12人回复
【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带已经有12人回复
RT-PCR后的cDNA呢？已经有17人回复
谁做过双链RNA的RT-PCR 已经有4人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-03-19 16:33:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xjc521

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 13.7
帖子: 2
在线: 41分钟
虫号: 640830

★ ★ ★ ★
syd89522(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+3): 辛苦~ 2011-03-27 20:32:55

RT-PCR 步骤
1）向需要裂解的细胞中加入1ml的Tirozl
2）加入20%的三氯甲烷剧烈震荡15秒，冰上静置2~3min，4度离心12000rpm/min 15min
4）吸取上层液体放入到新的DEPC处理过的EP管中，加入等量的异丙醇轻柔摇晃15秒，冰上静置10分钟，4度离心12000rpm/min 10min
5）弃去上清加入1ml 75%酒精（配的水用DEPC处理），4度离心12000rpm/min 5min，弃去上清
6）重复步骤5
7）弃去上清，加入50微升的DEPC水溶解后备用

RT-PCR 20微升体系
RNA  10微升
AMV  2微升
dNTP 2微升
oLigd(T) 1微升
HRP 1微升
5 X buffer  4微升

RT-PCR步骤
将10微升RNA溶液 65度预变性10分钟
冰上冷却10分钟
加入其它成分
30度 10分钟
42度 1小时
72度 15分钟
4度  结束