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【求助/交流】RT-PCR最原始的做法然后描述
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| 就是最老套的半定量PCR，被问之what tpye of RT-PCR and what conditions were used for extraction and expression of RNA probes?该如何回答呢？请教高手 |
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syd89522(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+3): 辛苦~ 2011-03-27 20:32:55
syd89522(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+3): 辛苦~ 2011-03-27 20:32:55
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RT-PCR 步骤 1）向需要裂解的细胞中加入1ml的Tirozl 2）加入20%的三氯甲烷剧烈震荡15秒，冰上静置2~3min，4度离心12000rpm/min 15min 4）吸取上层液体放入到新的DEPC处理过的EP管中，加入等量的异丙醇轻柔摇晃15秒，冰上静置10分钟，4度离心12000rpm/min 10min 5）弃去上清加入1ml 75%酒精（配的水用DEPC处理），4度离心12000rpm/min 5min，弃去上清 6）重复步骤5 7）弃去上清，加入50微升的DEPC水溶解后备用 RT-PCR 20微升体系 RNA 10微升 AMV 2微升 dNTP 2微升 oLigd(T) 1微升 HRP 1微升 5 X buffer 4微升 RT-PCR步骤 将10微升RNA溶液 65度预变性10分钟 冰上冷却10分钟 加入其它成分 30度 10分钟 42度 1小时 72度 15分钟 4度 结束 |
4楼2011-03-27 19:58:48
