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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNA的问题
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tutufei

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA的问题

1.RNA电泳需要注意哪些，需要什么内参吗，我想要看下RNA提取的质量情况
2.如何去除RNA的DNA污染呢，我要进一步做RT-PCR,然后扩增目的条带，如果有DNA污染，就都能扩出来了
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1楼 2011-03-16 09:24:02
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szylnl

银虫 (小有名气)
tutufei(金币+2): 谢谢 2011-04-24 18:47:26
我有个方法 或许可以在电泳时防止降解，胶新配，缓冲液用DEPC-水配，这些是必须的，我每次陪完胶，加好缓冲液之后，都将电泳槽放进超净台里用紫外照2个小时，这样基本上没有降解，5srRNA看不见，28是18的两倍左右。DNA污染的问题是听麻烦的，尤其是做RT的时候，所以还是要加DNA酶。
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14楼2011-03-23 10:27:50
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mafang68

金虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-16 09:47:27
tutufei(金币+1): 谢了 2011-03-21 21:22:37
RNA质量可以测OD260（好像是，记不清了）值，在1.8-2.0间好
不是有好几步洗的过程么，哪有那么多DNA啊
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2楼2011-03-16 09:38:26
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)
tutufei(金币+1): 不是，手提哦 2011-03-21 21:23:28
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-03-16 09:24:02:
1.RNA电泳需要注意哪些，需要什么内参吗，我想要看下RNA提取的质量情况
2.如何去除RNA的DNA污染呢，我要进一步做RT-PCR,然后扩增目的条带，如果有DNA污染，就都能扩出来了

RNA电泳要用新的胶和新的电泳缓冲液，电泳槽什么的洗干净就可以了，RNA的质量主要还是RNA提取过程决定的。像楼上说的那样就行啦。你是用试剂盒吗？
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3楼2011-03-16 09:41:55
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nininini

银虫 (小有名气)
★
翱宇(金币+1): 不错，谢谢交流，DNA的消化应该还有一步抽提，补加DEPC水到400ul，以氯仿抽提就行了 2011-03-16 23:57:21
tutufei(金币+8): 谢谢 2011-03-21 21:35:36
电泳如楼上所说应该没问题，当然用ＤＥＰＣ处理过的水制胶及缓冲液应该会更好～～ＲＮＡ质量可以通过OD260/280，比例在1.8~2.再就是电泳看图了，28s/18s或23s/16s大约为2:1,
除DNA如果怕不干净的话可以用DNase消化一下，再除下蛋白，一般应该没问题，可以用RNA做下PCR验证是否有DNA污染
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4楼2011-03-16 10:18:26
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