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tutufei

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于RNA的问题

1.RNA电泳需要注意哪些,需要什么内参吗,我想要看下RNA提取的质量情况
2.如何去除RNA的DNA污染呢,我要进一步做RT-PCR,然后扩增目的条带,如果有DNA污染,就都能扩出来了
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nininini

银虫 (小有名气)



翱宇(金币+1): 不错,谢谢交流,DNA的消化应该还有一步抽提,补加DEPC水到400ul,以氯仿抽提就行了 2011-03-16 23:57:21
tutufei(金币+8): 谢谢 2011-03-21 21:35:36
电泳如楼上所说应该没问题,当然用DEPC处理过的水制胶及缓冲液应该会更好~~RNA质量可以通过OD260/280,比例在1.8~2.再就是电泳看图了,28s/18s或23s/16s大约为2:1,
除DNA如果怕不干净的话可以用DNase消化一下,再除下蛋白,一般应该没问题,可以用RNA做下PCR验证是否有DNA污染
4楼2011-03-16 10:18:26
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mafang68

金虫 (著名写手)



lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-16 09:47:27
tutufei(金币+1): 谢了 2011-03-21 21:22:37
RNA质量可以测OD260(好像是,记不清了)值,在1.8-2.0间好
不是有好几步洗的过程么,哪有那么多DNA啊
2楼2011-03-16 09:38:26
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


tutufei(金币+1): 不是,手提哦 2011-03-21 21:23:28
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-03-16 09:24:02:
1.RNA电泳需要注意哪些,需要什么内参吗,我想要看下RNA提取的质量情况
2.如何去除RNA的DNA污染呢,我要进一步做RT-PCR,然后扩增目的条带,如果有DNA污染,就都能扩出来了

RNA电泳要用新的胶和新的电泳缓冲液,电泳槽什么的洗干净就可以了,RNA的质量主要还是RNA提取过程决定的。像楼上说的那样就行啦。你是用试剂盒吗?
3楼2011-03-16 09:41:55
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tutufei

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by tangchaoxi at 2011-03-16 09:41:55:
RNA电泳要用新的胶和新的电泳缓冲液,电泳槽什么的洗干净就可以了,RNA的质量主要还是RNA提取过程决定的。像楼上说的那样就行啦。你是用试剂盒吗?

手提的,用别人实验室的试剂(汗!),人家用biozol试剂处理植物,不知道能不能用来处理细菌,听说真核的mRNA比原核的稳定是吗,文献上有说细菌mRNA半衰期就几分钟,看人家提植物RNA很粗犷啊,跟提一般的DNA没两样,跑电泳也是跟一般的一样,哎,好不放心,还有有试剂盒说明书标明细菌用量1*107--5*108次方个是什么概念?好多问题啊,麻烦大家啦
5楼2011-03-16 23:51:05
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