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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNA的问题
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tutufei

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA的问题

1.RNA电泳需要注意哪些，需要什么内参吗，我想要看下RNA提取的质量情况
2.如何去除RNA的DNA污染呢，我要进一步做RT-PCR,然后扩增目的条带，如果有DNA污染，就都能扩出来了
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1楼 2011-03-16 09:24:02
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nininini

银虫 (小有名气)
tutufei(金币+1): 谢谢 2011-04-24 18:48:30
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-03-21 21:30:51:
ＲＮＡOD260/280是用普通的紫外分光光度计检测吗？实验室的比色皿最少容量是1ml，而提取的RNA量很少的啊

如果提取的浓度够大的话可以进行适当稀释~~有40微升的比色皿，不过我没用，就将RNA溶液稀释了15~30倍，使得读数在0.1~0.8，提取的RNA如果量太低就不合适用这种方法了，直接电泳估计浓度好了~
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13楼2011-03-23 10:01:51
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mafang68

金虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-16 09:47:27
tutufei(金币+1): 谢了 2011-03-21 21:22:37
RNA质量可以测OD260（好像是，记不清了）值，在1.8-2.0间好
不是有好几步洗的过程么，哪有那么多DNA啊
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2楼2011-03-16 09:38:26
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)
tutufei(金币+1): 不是，手提哦 2011-03-21 21:23:28
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-03-16 09:24:02:
1.RNA电泳需要注意哪些，需要什么内参吗，我想要看下RNA提取的质量情况
2.如何去除RNA的DNA污染呢，我要进一步做RT-PCR,然后扩增目的条带，如果有DNA污染，就都能扩出来了

RNA电泳要用新的胶和新的电泳缓冲液，电泳槽什么的洗干净就可以了，RNA的质量主要还是RNA提取过程决定的。像楼上说的那样就行啦。你是用试剂盒吗？
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3楼2011-03-16 09:41:55
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nininini

银虫 (小有名气)
★
翱宇(金币+1): 不错，谢谢交流，DNA的消化应该还有一步抽提，补加DEPC水到400ul，以氯仿抽提就行了 2011-03-16 23:57:21
tutufei(金币+8): 谢谢 2011-03-21 21:35:36
电泳如楼上所说应该没问题，当然用ＤＥＰＣ处理过的水制胶及缓冲液应该会更好～～ＲＮＡ质量可以通过OD260/280，比例在1.8~2.再就是电泳看图了，28s/18s或23s/16s大约为2:1,
除DNA如果怕不干净的话可以用DNase消化一下，再除下蛋白，一般应该没问题，可以用RNA做下PCR验证是否有DNA污染
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4楼2011-03-16 10:18:26
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