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【求助/交流】求解蛋白质分离纯化的难题
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大家好，最近在做蛋白质的分离纯化实验，实验中遇到了一些难题，还请高手指点。 我做真菌产一种酶的分离纯化，但是该菌也产很多多糖，不知用什么办法除去？ 对发酵液盐析的蛋白质实验时，经过离心，得到的片状物浮在液面上，管底部液体澄清，没有沉淀，请问这是什么原因，怎么解决？Sample Text |
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冼亮淀粉酶
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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国内的论文要选择性地看，有些是作假的。 2.2.6.1.4淀粉酶活力的测定 （1）收集发酵上清液并作适当稀释。 （2）在2mL EP管中加入350µL含0.25%可溶性淀粉的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，在已调整至需要温度的水浴锅中预热3min； （3）取淀粉酶粗酶液50µl加入至缓冲液中； （4）到达设定时间后，每管加0.8ml DNS试剂终止酶反应； （5）沸水煮5 min后冷水冷却，瞬时离心将附着在管壁上的液体甩下； （6）沸水煮5min的灭活上清液作同样处理作为对照； （7）取200µl加到血清板上，测定540nm处光吸收值； 每次实验设三个重复，粗酶液活力计算依照以下方法： G×n×20 1ml发酵上清液所含有酶活单位= —————— 1000 式中G：经淀粉酶作用后释放的葡萄糖量；n：上清液稀释倍数；1000：释放的葡萄糖量µg换算至mg；20：参与反应的粗酶液的量50µl换算至1mL |
20楼2012-03-22 14:19:01
3楼2011-03-11 18:35:22
4楼2011-03-11 20:46:55
5楼2011-03-11 20:55:07
