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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求解蛋白质分离纯化的难题
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609351499

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求解蛋白质分离纯化的难题

大家好，最近在做蛋白质的分离纯化实验，实验中遇到了一些难题，还请高手指点。
    我做真菌产一种酶的分离纯化，但是该菌也产很多多糖，不知用什么办法除去？
    对发酵液盐析的蛋白质实验时，经过离心，得到的片状物浮在液面上，管底部液体澄清，没有沉淀，请问这是什么原因，怎么解决？Sample Text
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1楼 2011-03-11 18:15:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1350208楼: Originally posted by 892091690 at 2012-03-22 12:52:05:
我用DNS法测固态发酵所产淀粉酶活性时 参比管中是不加淀粉的粗酶液，测定管是加了淀粉的酶液，测得结果要么负值要么0~0.1之间的数值，可能是什么原因呢？一定要用蒸馏水做参比吗？我看有些文献中还设有对照管 没 ...

国内的论文要选择性地看，有些是作假的。

2.2.6.1.4淀粉酶活力的测定
（1）收集发酵上清液并作适当稀释。
（2）在2mL EP管中加入350µL含0.25%可溶性淀粉的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，在已调整至需要温度的水浴锅中预热3min；
（3）取淀粉酶粗酶液50µl加入至缓冲液中；
（4）到达设定时间后，每管加0.8ml DNS试剂终止酶反应；
（5）沸水煮5 min后冷水冷却，瞬时离心将附着在管壁上的液体甩下；
（6）沸水煮5min的灭活上清液作同样处理作为对照；
（7）取200µl加到血清板上，测定540nm处光吸收值；
每次实验设三个重复，粗酶液活力计算依照以下方法：
                        G×n×20
1ml发酵上清液所含有酶活单位= ——————               
                         1000
式中G：经淀粉酶作用后释放的葡萄糖量；n：上清液稀释倍数；1000：释放的葡萄糖量µg换算至mg；20：参与反应的粗酶液的量50µl换算至1mL
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20楼2012-03-22 14:19:01
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~明晓溪~

木虫 (正式写手)
★
609351499(金币+2):谢谢参与
我也遇到同样的事情，实际上那些漂浮物可以丢掉了，估计是一些多糖，你不放心的话，跑个电泳看看。我觉的管壁上多少会有些蛋白的，你洗洗看看。
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3楼2011-03-11 18:35:22
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★
609351499(金币+2):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 609351499 at 2011-03-11 18:15:09:
大家好，最近在做蛋白质的分离纯化实验，实验中遇到了一些难题，还请高手指点。
    我做真菌产一种酶的分离纯化，但是该菌也产很多多糖，不知用什么办法除去？
    对发酵液盐析的蛋白质实验时，经过离心，得到 ...

走一次凝胶色谱试试，分离到的组分测下糖的含量。
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4楼2011-03-11 20:46:55
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
★
609351499(金币+2):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by zyxme at 2011-03-11 18:33:05:

学习下
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5楼2011-03-11 20:55:07
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