[交流] 【求助/交流】求富含GC的片段的PCR条件

Originally posted by bijing_1111 at 2011-03-10 15:14:24:
做过GC含量70%多的片段扩增，用了GC Buffer（好像是TAKARA的），参照说明书的条件，体系没有什么特别，主要是变性时间不要太长，一分钟就够了，GC Buffer裂解能力很强，循环中10s变性就够了。酶根据你的片段要求选 ...

Originally posted by 101202139 at 2011-03-10 15:40:31:
最好加入5%-10%的DMSO（二甲基亚砜）

Originally posted by yabxxh at 2011-03-10 15:50:55:
呵呵，我是克隆过一段人的基因，GC含量非常高，用的是TAKARA的primerstar hs热启动版，gc buffer II，注意片段长度，退火10s足够，应该不是很难得到。真不行前面加一段60度得降落PCR（约5个循环），后面TM值扩增。 ...

Originally posted by aaron2012 at 2011-03-10 15:48:15:
你说的变性时间是指最开始的那个变性时间，还是循环里的变形时间？
我这阵子也有10×GCEnhencer。你们在做的时候一般加多少啊？

Originally posted by yabxxh at 2011-03-10 15:50:55:
呵呵，我是克隆过一段人的基因，GC含量非常高，用的是TAKARA的primerstar hs热启动版，gc buffer II，注意片段长度，退火10s足够，应该不是很难得到。真不行前面加一段60度得降落PCR（约5个循环），后面TM值扩增。 ...