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[求助] GC含量很高的模板怎么能顺利PCR？

总DNA提取后，电泳显示条带清晰，PCR条件摸索多次，引物设计还算合理，但是PCR就是很难P出来，成功率很低。实验室有人也因为这些情况而改用化学合成目的DNA。求高人指点

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宁静以致远

1楼2011-09-27 17:02:31

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瓶儿花

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 2011-09-28 07:22:07

GC含量高的模板的话要采用带有GC buffer 的LA Taq酶来做PCR，GC buffer可以促进解链，我也做的是GC含量很高的模板，链霉菌的DNA扩展。用的是TAKARA的LA taq带GC buffer的试剂盒，扩出来效果很好的。之前也是一直摸索来着，普通的PCR buffer也是怎么都扩不出来，后来改用GC buffer以后扩出来的条带就很亮了。你也可以试试。我两个月摸索的结果哦！