24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2595  |  回复: 4

dreamswing

木虫 (小有名气)

[求助] GC含量很高的模板怎么能顺利PCR?

总DNA提取后,电泳显示条带清晰,PCR条件摸索多次,引物设计还算合理,但是PCR就是很难P出来,成功率很低。实验室有人也因为这些情况而改用化学合成目的DNA。求高人指点
回复此楼
宁静以致远
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 2011-09-28 07:22:07
GC含量高的模板的话要采用带有GC buffer 的LA Taq酶来做PCR,GC buffer可以促进解链,我也做的是GC含量很高的模板,链霉菌的DNA扩展。用的是TAKARA的LA taq带GC buffer的试剂盒,扩出来效果很好的。之前也是一直摸索来着,普通的PCR buffer也是怎么都扩不出来,后来改用GC buffer以后扩出来的条带就很亮了。你也可以试试。我两个月摸索的结果哦!
2楼2011-09-27 23:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

楼上正解
山水凤凰
3楼2011-09-27 23:50:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 大方的老板 实验的福音 2011-09-28 20:10:47
如果你们老板舍不得买,只能靠自己摸索,可以在PCR体系中加入甘油以及表面活化剂二甲基亚砜,大约在10%左右,自己可以摸索一下浓度,5%-30%
真相是最大的奢侈品
4楼2011-09-28 17:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李宇勐

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们用的是美国KAPA biosystems 2G Robust PCR  超强扩增复杂模板的试剂盒  记得才400块  。
当时做甲基化实验  GC含量高达80%
生物基础医学研究、整体课题设计及外包、临床前课题研究项目外包
5楼2011-09-29 08:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dreamswing 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081700,311,求调剂 +14 冬十三 2026-04-04 15/750 2026-04-06 01:57 by BruceLiu320
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 080200学硕,机械工程专业277分,求带走! +7 瓶子PZ 2026-03-31 7/350 2026-04-05 17:49 by liucky
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 材料专硕322分 +11 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-02 11/550 2026-04-04 23:37 by 永字号
[考研] 专硕310求调剂 +5 捞捞我…. 2026-04-04 6/300 2026-04-04 23:33 by barlinike
[考研] 11408,335分,本科211,求调剂,可转专业 +5 鳄梨大鳄鱼 2026-04-03 5/250 2026-04-04 22:49 by chongya
[考研] 求调剂 +7 xzghyuj 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:25 by oooqiao
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] +5 雾与海 2026-04-02 6/300 2026-04-04 19:53 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂 +4 美丽的youth_ 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:16 by imissbao
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂!!! +8 贝呗钡钡 2026-03-30 8/400 2026-04-03 09:41 by hypershenger
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 材料专硕322分 +11 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 11/550 2026-04-02 10:52 by lnilvy
[考研] 354求调剂 +4 lxb598 2026-03-31 5/250 2026-04-02 09:55 by Jaylen.
[考研] 0710生物学,325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 生物与医药考研调剂 +5 铁憨憨123425 2026-03-31 5/250 2026-04-01 18:01 by syh9288
信息提示
请填处理意见