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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » GC含量很高的模板怎么能顺利PCR？
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dreamswing

木虫 (小有名气)

[求助] GC含量很高的模板怎么能顺利PCR？

总DNA提取后，电泳显示条带清晰，PCR条件摸索多次，引物设计还算合理，但是PCR就是很难P出来，成功率很低。实验室有人也因为这些情况而改用化学合成目的DNA。求高人指点
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宁静以致远
1楼 2011-09-27 17:02:31
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 大方的老板 实验的福音 2011-09-28 20:10:47
如果你们老板舍不得买，只能靠自己摸索，可以在PCR体系中加入甘油以及表面活化剂二甲基亚砜，大约在10%左右，自己可以摸索一下浓度，5%-30%
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真相是最大的奢侈品
4楼2011-09-28 17:30:55
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 2011-09-28 07:22:07
GC含量高的模板的话要采用带有GC buffer 的LA Taq酶来做PCR，GC buffer可以促进解链，我也做的是GC含量很高的模板，链霉菌的DNA扩展。用的是TAKARA的LA taq带GC buffer的试剂盒，扩出来效果很好的。之前也是一直摸索来着，普通的PCR buffer也是怎么都扩不出来，后来改用GC buffer以后扩出来的条带就很亮了。你也可以试试。我两个月摸索的结果哦！
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2楼2011-09-27 23:16:53
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李宇勐

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们用的是美国KAPA biosystems 2G Robust PCR  超强扩增复杂模板的试剂盒  记得才400块  。
当时做甲基化实验  GC含量高达80%
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生物基础医学研究、整体课题设计及外包、临床前课题研究项目外包
5楼2011-09-29 08:59:05
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