应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求富含GC的片段的PCR条件
51/1返回列表
查看: 2428  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

aaron2012

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求富含GC的片段的PCR条件

各位大侠，不知道各位在做富含GC片段的时候有没有什么心得，比较好的PCR条件。其他还需要注意的事项。希望得到大家的帮助。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-10 14:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★
aaron2012(金币+3): 2011-03-10 16:26:30
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-10 19:34:59
呵呵，我是克隆过一段人的基因，GC含量非常高，用的是TAKARA的primerstar hs热启动版，gc buffer II，注意片段长度，退火10s足够，应该不是很难得到。真不行前面加一段60度得降落PCR（约5个循环），后面TM值扩增。好运
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-03-10 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

bijing_1111

新虫 (初入文坛)
★
aaron2012(金币+3): 2011-03-10 15:49:40
最爱花诗雨(金币+1): 鼓励新虫交流~~ 2011-03-10 17:12:33
做过GC含量70%多的片段扩增，用了GC Buffer（好像是TAKARA的），参照说明书的条件，体系没有什么特别，主要是变性时间不要太长，一分钟就够了，GC Buffer裂解能力很强，循环中10s变性就够了。酶根据你的片段要求选择，没要求普通tag酶就ok。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-10 15:14:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

101202139

铜虫 (小有名气)
aaron2012(金币+1): 2011-03-10 15:49:31
最好加入5%-10%的DMSO（二甲基亚砜）
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-10 15:40:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aaron2012

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by bijing_1111 at 2011-03-10 15:14:24:
做过GC含量70%多的片段扩增，用了GC Buffer（好像是TAKARA的），参照说明书的条件，体系没有什么特别，主要是变性时间不要太长，一分钟就够了，GC Buffer裂解能力很强，循环中10s变性就够了。酶根据你的片段要求选 ...

你说的变性时间是指最开始的那个变性时间，还是循环里的变形时间？
我这阵子也有10×GCEnhencer。你们在做的时候一般加多少啊？
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-10 15:48:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭