| 查看: 3975 | 回复: 23 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
|
|||
| T载体如果不跟PCR产物连接， 不是由于T末端，自己不能自连吗? 这样不应该lacZ基因中间断裂 不能表达吗? 为什么没有连接PCR产物的菌班是蓝色的呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有247人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 分子生物学PCR
已经有81人回复
- 什么细菌可以抑制霉菌的生长呀？
已经有15人回复
- 那些大肠杆菌感受态是Dam+型，基因可被DpnI降解
已经有6人回复
- 固体琼脂平板为啥倒置培养呀？来个专业的解答，大家讨论讨论
已经有27人回复
- 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?
已经有7人回复
- tail-PCR问题，求指导
已经有9人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
已经有21人回复
- 普鲁兰做药物载体
已经有7人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
已经有12人回复
- PCR-DGGE技术寻求
已经有9人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 【求助/交流】连到pGEM-T载体上的PCR回收产物，提质粒后还需要做酶切验证吗？
已经有13人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
【宁德时代招聘】AI 物理学家
+1/187
-
中国科学院山西煤炭化学研究所水污染防治与资源化利用方向招本科/硕士线上实习生
+1/81
-
湖南师范大学杨亚辉/江浩团队招收电催化方向2026年博士生1名
+1/78
-
中国计量大学集成电路与微系统国家高层次人才团队招收博士生
+1/51
-
哈工大深圳校区 博士招生 燃料电池/电解制氢
+1/31
-
中南民族大学超支化聚合物团队2026年博士研究生招生
+1/31
-
中国科学院大学杰青团队招聘脂质体代谢方向博士后
+1/29
-
上海大学昝鹏教授、军事医学研究院伯晓晨研究员/倪铭副研究员 课题组招聘博士生
+2/20
-
招收2026级博士
+1/20
-
口腔健康的标准
+1/14
-
杭州师范大学心理系赛李阳课题组招收2026年学术学位博士研究生
+1/9
-
加急！请问最近有没有投Current Research in Food Science 期刊的童鞋们？需要咨询
+1/8
-
海南师范大学招收化学博士（光电功能材料课题组招收博士研究生）
+1/8
-
固态电池到底有没有做的前途
+1/7
-
海南师范大学招收化学博士（光电功能材料课题组招收博士研究生）
+1/6
-
【长期有效 】北理工柔性电子国家杰青团队招博士后及科研助理
+1/6
-
实验室研究员
+1/4
-
知名外资仪器厂家急招Application Scientist：成都
+1/4
-
求一种水性聚氨酯固化剂
+1/2
-
上海交大核酸合成生物方向招聘化学、生物、生医工、植物等研究背景博士后、科研助理
+1/1
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 20:01:41
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 20:01:41
|
建议楼主好好看看蓝白斑的基本原理~~~~~~~ 如果PCR产物插入了MCS位点，则LAZ基因被截断，不能表达，则克隆菌呈白色。 如果没插入MCS位点，而是自连的话，LAZ基因能表达，表达后产物与X-gal产生反应，变成蓝色蓝色。 T载体由于制作的问题，是会有自连得。如果没有自连的话 ，转入细菌，抗生素基因不能表达，细菌就不能在有抗生素的平板上生长。那么就不会产生菌落，产生了菌落的都是含有环形质粒的。 至于T载体为什么会自连，可以看下T载体是怎么生产的，一般都是用Eco5酶切出平末端，然后再平末端上加T尾，加T尾的效率并不是百分百的。 |
8楼2011-03-07 11:56:19
2楼2011-03-07 10:12:02
3楼2011-03-07 10:52:10
★ ★ ★ ★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+5): 鼓励回答！ 2011-03-07 11:21:08
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+5): 鼓励回答！ 2011-03-07 11:21:08
|
如果你们清楚T载体是怎么做出来的，就知道兰斑怎么来的了。 如果真的是两端都是T头，这个T载体是无法自连起来的。 但是为什么会有自连呢？是因为在制作T载体的过程中，除了两头是T的情况，不可避免的会还有一头是T突出，一头是平端（这个残留，但是也无法自连），或者两头是平端，或者是一头是T头，一头是A头，或者干脆就是微量的原始环状质粒无法完全分开，微量的环状原始质粒混在线性T载体成品里面。除了第一种情况一头T头，一头平端无法连接。其它几种情况加连接酶连接后，都会表现出环状的质粒，也就是蓝斑点了。至于为什么会混杂这几种东西，就牵涉到了基础的原理，和方法了，自己去查资料吧。 做T载体的工艺，就是尽可能的做到，全部是两头T头的载体，这样理论上就不会有篮斑了。但是这是不可能的，总会混杂上面几种情况造成蓝斑。混杂越多，蓝斑比例越多。也就是说明了T载体质量越差。这个是判断T载体好坏的一个最重要指标之一。 加T和酶切T载体的方法，没有可能达到100%不混杂上面几种情况。但是本公司做的T载体工艺，蓝色斑点小于10%，很多情况下小于5%，质量已经是达到顶级水平。其它公司很多工艺无法达到，就会出现较多的篮斑，或者两边T头掉了后，两端成了平端破坏读码框自连成白斑的假阳性情况。 |
4楼2011-03-07 11:19:54
简单回复
198612楼
2011-03-07 12:48
回复
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
