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[交流]
【求助/交流】提取的DNA降解了？？
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本人最近在提取人外周血DNA（手工NAI法提取）时，电泳后发现DNA条带好多呈弥散状，貌似降解了（如下图所示），一直不得改善，请各位支个招吧，真愁人呀~~~     |
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参考
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xwsooo(金币+1): 灰常感谢~~~ 2011-03-04 18:05:01
看天(金币+1): 热心 2011-03-04 18:47:34
xwsooo(金币+1): 灰常感谢~~~ 2011-03-04 18:05:01
看天(金币+1): 热心 2011-03-04 18:47:34
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【操作步骤】（易生物 参考） 1、取新鲜抗凝血100μl置Eppendorf（Ep）管中，离心10000rpm×1min。 2、弃上清，加ddH2O200μl，摇匀20sec。 3、加6mol/LNaI200μl，缓慢倒置摇匀20sec。 4、于管内加氯仿/异戊醇（24：1）400μl，摇匀20sec，离心12000rpm×12min 5、吸取上层水相360μl置一新Ep管中，加纯异丙醇200μl，摇匀20sec 6、室温放置15min，离心14000rpm×12min 7、小心弃去上清，再加37%异丙醇1ml（勿摇动），离心14000rpm×12min 8、小心弃去异丙醇，晾干。 9、加50μlTE缓冲液溶解DNA，以琼脂糖凝胶电泳鉴定或-20℃保存。 【注意事项】 1、标本必须新鲜，提取前细胞应保持完整。所用Ep管，吸嘴等器物及ddH2O、试剂等应高压灭菌，操作尽量在4℃以下进行。 2、混匀试剂、吸取上清等操作时应避免动作剧烈。 3、弃异丙醇时动作应轻，切忌甩干，以免DNA丢失。 4、0.54~1倍的异丙醇可选择性沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA、rRNA及多糖不产生沉淀。一般不需在低温条件下放置。其缺点是易使盐类与DNA共沉淀；在DNA沉淀中的异丙醇难以挥发除去，所以常规需要70%的乙醇漂洗DNA沉淀物。 |
11楼2011-03-04 10:31:52
brightfuture01
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2楼2011-03-03 20:13:00
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