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【求助/交流】提取的DNA降解了??
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brightfuture01
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2楼2011-03-03 20:13:00
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brightfuture01
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brightfuture01
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参考
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看天(金币+1): 热心 2011-03-04 18:47:34
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【操作步骤】(易生物 参考) 1、取新鲜抗凝血100μl置Eppendorf(Ep)管中,离心10000rpm×1min。 2、弃上清,加ddH2O200μl,摇匀20sec。 3、加6mol/LNaI200μl,缓慢倒置摇匀20sec。 4、于管内加氯仿/异戊醇(24:1)400μl,摇匀20sec,离心12000rpm×12min 5、吸取上层水相360μl置一新Ep管中,加纯异丙醇200μl,摇匀20sec 6、室温放置15min,离心14000rpm×12min 7、小心弃去上清,再加37%异丙醇1ml(勿摇动),离心14000rpm×12min 8、小心弃去异丙醇,晾干。 9、加50μlTE缓冲液溶解DNA,以琼脂糖凝胶电泳鉴定或-20℃保存。 【注意事项】 1、标本必须新鲜,提取前细胞应保持完整。所用Ep管,吸嘴等器物及ddH2O、试剂等应高压灭菌,操作尽量在4℃以下进行。 2、混匀试剂、吸取上清等操作时应避免动作剧烈。 3、弃异丙醇时动作应轻,切忌甩干,以免DNA丢失。 4、0.54~1倍的异丙醇可选择性沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA、rRNA及多糖不产生沉淀。一般不需在低温条件下放置。其缺点是易使盐类与DNA共沉淀;在DNA沉淀中的异丙醇难以挥发除去,所以常规需要70%的乙醇漂洗DNA沉淀物。 |
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