| 查看: 2704 | 回复: 12 | |||
[交流]
【求助/交流】蛋白降解严重，求救！
|
|||
|
先谢谢大家看我的贴子，也请大家耐心的看完，帮助我解决问题，非常感谢！ 我现在做的是假病毒的原核表达。假病毒会把目的基因包裹在里面，形成病毒蛋白颗粒。 我的实验步骤是这样的： 1.构建好假病毒表达载体，即把目的基因与假病毒序列及pET28a连在一起，转化BL21 2.IPTG诱导表达。 3.离心收集菌体，加入超声buffer（加入溶菌酶及PMSF），37摄氏度摇1h 4.超声破碎，工作5s，间歇5s，时间为1min，做10次 5.离心30min，收集上清 6.超声上清用RNase和DNase双酶消化1h，加入0.5M的EDTA把酶灭活 这样得到的超声上清含有我所需要的病毒蛋白颗粒 问题是： 一开始的时候诱导表达的浓度都很高，要稀释几个数量级才能用。但是随着时间推移，一直做下来，诱导表达量变得很低，双酶消化后检查病毒颗粒的浓度，也越来越低，三四个月下来，起码降了三个数量级。 请问： 我的实验步骤中有没有要注意的地方，或做错的地方？ 蛋白降解这么严重的原因有哪些？ 我该如何防止？ 谢谢！  |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有164人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- WB检测磷酸化蛋白
已经有41人回复
- 【求助/交流】提取的DNA降解了？？
已经有16人回复
- 【求助】氧化铟降解罗丹明B的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】细胞因子在-80℃下，降解情况如何？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】质粒降解求教！急！
已经有9人回复
- 【求助】丝素蛋白组织工程支架材料如何做降解实验？
已经有8人回复
- 【求助/交流】免疫共沉淀蛋白质降解问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】酵母表达外源蛋白，His-tag降解怎么办
已经有5人回复
- 【求助】淀粉做成可降解塑料
已经有10人回复
- 【求助】二氧化钛光催化降解亚甲基蓝
已经有41人回复
- 【求助】降解率
已经有12人回复
- 【求助】可降解材料
已经有27人回复
2楼2011-02-18 13:25:23
3楼2011-02-18 14:27:40
4楼2011-02-18 14:34:48
5楼2011-02-18 15:04:07
6楼2011-02-18 15:23:28
7楼2011-02-18 15:23:54
8楼2011-02-18 15:24:26
9楼2011-02-18 19:18:55
11楼2011-02-19 11:42:17
12楼2011-02-21 09:32:24
简单回复
zyxme10楼
2011-02-18 19:32
回复
sxxuan(金币+1): 2011-02-21 09:33:06
xiaozijiang13楼
2012-08-01 10:27
回复
10