| 查看: 2532 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】蛋白降解严重，求救！
|
|||
|
先谢谢大家看我的贴子，也请大家耐心的看完，帮助我解决问题，非常感谢！ 我现在做的是假病毒的原核表达。假病毒会把目的基因包裹在里面，形成病毒蛋白颗粒。 我的实验步骤是这样的： 1.构建好假病毒表达载体，即把目的基因与假病毒序列及pET28a连在一起，转化BL21 2.IPTG诱导表达。 3.离心收集菌体，加入超声buffer（加入溶菌酶及PMSF），37摄氏度摇1h 4.超声破碎，工作5s，间歇5s，时间为1min，做10次 5.离心30min，收集上清 6.超声上清用RNase和DNase双酶消化1h，加入0.5M的EDTA把酶灭活 这样得到的超声上清含有我所需要的病毒蛋白颗粒 问题是： 一开始的时候诱导表达的浓度都很高，要稀释几个数量级才能用。但是随着时间推移，一直做下来，诱导表达量变得很低，双酶消化后检查病毒颗粒的浓度，也越来越低，三四个月下来，起码降了三个数量级。 请问： 我的实验步骤中有没有要注意的地方，或做错的地方？ 蛋白降解这么严重的原因有哪些？ 我该如何防止？ 谢谢！  |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有176人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- WB检测磷酸化蛋白
已经有41人回复
- 【求助/交流】提取的DNA降解了？？
已经有16人回复
- 【求助】氧化铟降解罗丹明B的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】细胞因子在-80℃下，降解情况如何？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】质粒降解求教！急！
已经有9人回复
- 【求助】丝素蛋白组织工程支架材料如何做降解实验？
已经有8人回复
- 【求助/交流】免疫共沉淀蛋白质降解问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】酵母表达外源蛋白，His-tag降解怎么办
已经有5人回复
- 【求助】淀粉做成可降解塑料
已经有10人回复
- 【求助】二氧化钛光催化降解亚甲基蓝
已经有41人回复
- 【求助】降解率
已经有12人回复
- 【求助】可降解材料
已经有27人回复
8楼2011-02-18 15:24:26
2楼2011-02-18 13:25:23
3楼2011-02-18 14:27:40
5楼2011-02-18 15:04:07