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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助，新手组培及细胞悬浮培养
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baggio00009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助，新手组培及细胞悬浮培养

大家好，我是新手做组培及细胞培养，有几个问题想问问大家。
1.我想问问做MS培养基的时候激素应该在灭菌之前加还是之后加？要是在灭菌之后加比较好的话，应该如何操作才能不染菌呢
2.我做的植物在悬浮细胞培养继代的时候，我通常是过滤后取一定重量的细胞放入新培养基中，但是这种植物细胞很难过滤，很费时间，所以经常会染菌，我很郁闷，不知道我这么做对不对，是不是有其他的什么解决办法。
3. 有没有细胞悬浮培养方面比较好的书或者材料推荐一下，最好是实验方面的。不胜感激
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1楼2011-02-15 22:06:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ziman2003

银虫 (小有名气)
★ ★
baggio00009(金币+1): 2011-02-16 17:24:58
baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:21
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-02-18 10:54:02
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:59:09
您好！
我在研究生阶段做了大量的组培工作，主要是愈伤和诱导的过程。
首先，对于你说的激素的问题，所有的激素，包括生长素，细胞分裂素等等，都是需要0.22um的过滤器除菌过滤。然后待灭菌后的培养基室温凉至45度左右，加入激素。因为激素在高温下容易降解的。
其次，我没有做过细胞的悬浮培养，你可以找一些组织培养教材看看。好像本科的组织培养教材中就有描述，或者有关组培的实验指导技术。
希望对你有所帮助。
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3楼2011-02-16 16:38:15
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dacaoyuan5330

木虫 (小有名气)
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:57:50
引用回帖:
Originally posted by kun2199 at 2011-02-16 18:44:13:
把枪头剪了，用枪吸，按周继代，开始的愈伤组织体积要大，质量要好。

《体外培养的原理与技术》 薛庆善
这本书很好 讲的很全面 你可以看看
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7楼2011-02-18 15:53:20
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robocop

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基本上人工合成的都可以高温，提取的不行，比如玉米素，赤霉素就只能过滤了，有的赤霉素也高温，反正会死活一部分，一个浓度梯度的都失活了50%的话 也还是一个梯度
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15楼2012-05-19 00:17:30
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普通回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-02-16 10:39:34
baggio00009(金币+1): 2011-02-16 17:25:06
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:59:17
1.我们实验室一般都是加好后高温灭菌的
2.如需定量的话，将天平置于超净台紫外照射灭菌后，将培养器皿整体放入调零，定量初始细胞量
3关于书籍方面可以去你们的图书馆看看，我一般在我们图书馆能满足我的需求。
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2楼2011-02-16 08:45:32
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dacaoyuan5330

木虫 (小有名气)
baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:15
好像有本书 专门介绍怎样做细胞培养的 暂时忘记了 过后告诉你
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4楼2011-02-16 17:22:26
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kun2199

金虫 (小有名气)
baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:04
把枪头剪了，用枪吸，按周继代，开始的愈伤组织体积要大，质量要好。
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5楼2011-02-16 18:44:13
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baggio00009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dacaoyuan5330 at 2011-02-16 17:22:26:
好像有本书 专门介绍怎样做细胞培养的 暂时忘记了 过后告诉你

好的，谢谢
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6楼2011-02-18 01:59:24
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lichunlimy

银虫 (初入文坛)
★
dhd997(金币+1): 本版块有很多类似问题，可以搜索，多学习一下，你会进步的。 2011-02-22 09:47:22

哇 都是些高手啊  ，我看我还是得喝你们好好学习才行啊  好像看了我什么都不懂啊
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8楼2011-02-22 09:02:49
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wylee01

禁虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-24 15:31:12
本帖内容被屏蔽
9楼2011-02-24 14:11:49
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粉色蜗牛

铜虫 (小有名气)
要看是何种激素， 如果不耐高温的，那就要过滤灭菌了。
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10楼2011-02-24 15:29:22
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曾经遥远

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ziman2003 at 2011-02-16 16:38:15:
您好！
我在研究生阶段做了大量的组培工作，主要是愈伤和诱导的过程。
首先，对于你说的激素的问题，所有的激素，包括生长素，细胞分裂素等等，都是需要0.22um的过滤器除菌过滤。然后待灭菌后的培养基室温凉至 ...

学长你好，我想问一下灭菌后的培养基添加激素怎么操作才能使培养基不受污染呢？
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11楼2011-02-25 10:13:10
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桃子老好吃

金虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-20 18:35:13
大多数激素还是耐高温的吧，我们都是加了再灭的啊，不耐高温的话，再用过滤头在无菌操作台里加进去
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12楼2011-03-17 22:58:51
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jiebingzh

木虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+2): 鼓励 2011-03-20 18:35:04
如果所加激素在经过高压灭菌后失活，则需要将培养基先高压后再添加过滤灭菌的激素，然后将培养基摇匀并进行分装。这样操作量好控制。
细胞悬浮培养应该是用枪头来吸取一定体积的吧，具体的没操作过
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13楼2011-03-20 17:41:40
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lywac

铜虫 (小有名气)
我做的都是加了以后在灭菌的！比如NAA BA 和2，4--D
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14楼2011-03-28 11:00:42
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ruohanlqx

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
司徒镇强 《细胞培养》
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16楼2013-03-28 20:32:01
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Bella0224

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
激素要在超净工作台里，利用0.22um的过滤器进行除菌过滤，你可以下在外面将激素粉末溶解好，然后再在超净工作台里进行过滤，需要购买过滤器和注射器，找一个也是灭菌的离心管之类的，看你自己啦，然后用1.5mlEP管进行分装，保存在-20度~

激素和抗生素都可以配置1000×的母液，就是把你的目的浓度扩大1000倍，加的时候枪头要用灭菌过的，按照相应体积比例缩小加就行了~

加激素要等到灭菌后的培养基室凉至不烫手，温和的时候就差不多了，我们一般就是40度左右，激素在高温下会降解
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17楼2013-04-03 15:03:22
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1335363楼: Originally posted by 曾经遥远 at 2011-02-25 10:13:10
学长你好，我想问一下灭菌后的培养基添加激素怎么操作才能使培养基不受污染呢？...

所有的东西都要灭菌，包括枪头，包括培养基，包括你过滤后加入的容器（如离心管），在超净工作台操作，要点燃酒精灯，一般的话是不会染菌的
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18楼2013-04-03 15:05:01
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