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【求助/交流】求助,新手组培及细胞悬浮培养
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baggio00009
铜虫
(小有名气)
应助: 0
(幼儿园)
金币: 96.1
帖子: 76
在线: 17.7小时
虫号: 362488
[交流]
【求助/交流】求助,新手组培及细胞悬浮培养
大家好,我是新手做组培及细胞培养,有几个问题想问问大家。
1.我想问问做MS培养基的时候激素应该在灭菌之前加还是之后加?要是在灭菌之后加比较好的话,应该如何操作才能不染菌呢
2.我做的植物在悬浮细胞培养继代的时候,我通常是过滤后取一定重量的细胞放入新培养基中,但是这种植物细胞很难过滤,很费时间,所以经常会染菌,我很郁闷,不知道我这么做对不对,是不是有其他的什么解决办法。
3. 有没有细胞悬浮培养方面比较好的书或者材料推荐一下,最好是实验方面的。不胜感激
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2011-02-15 22:06:13
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Bella0224
金虫
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(幼儿园)
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在线: 25.9小时
虫号: 1281702
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
激素要在超净工作台里,利用0.22um的过滤器进行除菌过滤,你可以下在外面将激素粉末溶解好,然后再在超净工作台里进行过滤,需要购买过滤器和注射器,找一个也是灭菌的离心管之类的,看你自己啦,然后用1.5mlEP管进行分装,保存在-20度~
激素和抗生素都可以配置1000×的母液,就是把你的目的浓度扩大1000倍,加的时候枪头要用灭菌过的,按照相应体积比例缩小加就行了~
加激素要等到灭菌后的培养基室凉至不烫手,温和的时候就差不多了,我们一般就是40度左右,激素在高温下会降解
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17楼
2013-04-03 15:03:22
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wqj1988926
金虫
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虫号: 1156883
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-02-16 10:39:34
baggio00009(金币+1): 2011-02-16 17:25:06
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:59:17
1.我们实验室一般都是加好后高温灭菌的
2.如需定量的话,将天平置于超净台紫外照射灭菌后,将培养器皿整体放入调零,定量初始细胞量
3关于书籍方面可以去你们的图书馆看看,我一般在我们图书馆能满足我的需求。
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2楼
2011-02-16 08:45:32
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ziman2003
银虫
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虫号: 398082
★ ★
baggio00009(金币+1): 2011-02-16 17:24:58
baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:21
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-02-18 10:54:02
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:59:09
您好!
我在研究生阶段做了大量的组培工作,主要是愈伤和诱导的过程。
首先,对于你说的激素的问题,所有的激素,包括生长素,细胞分裂素等等,都是需要0.22um的过滤器除菌过滤。然后待灭菌后的培养基室温凉至45度左右,加入激素。因为激素在高温下容易降解的。
其次,我没有做过细胞的悬浮培养,你可以找一些组织培养教材看看。好像本科的组织培养教材中就有描述,或者有关组培的实验指导技术。
希望对你有所帮助。
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3楼
2011-02-16 16:38:15
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dacaoyuan5330
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baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:15
好像有本书 专门介绍怎样做细胞培养的 暂时忘记了 过后告诉你
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4楼
2011-02-16 17:22:26
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