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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助，新手组培及细胞悬浮培养
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baggio00009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助，新手组培及细胞悬浮培养

大家好，我是新手做组培及细胞培养，有几个问题想问问大家。
1.我想问问做MS培养基的时候激素应该在灭菌之前加还是之后加？要是在灭菌之后加比较好的话，应该如何操作才能不染菌呢
2.我做的植物在悬浮细胞培养继代的时候，我通常是过滤后取一定重量的细胞放入新培养基中，但是这种植物细胞很难过滤，很费时间，所以经常会染菌，我很郁闷，不知道我这么做对不对，是不是有其他的什么解决办法。
3. 有没有细胞悬浮培养方面比较好的书或者材料推荐一下，最好是实验方面的。不胜感激
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1楼 2011-02-15 22:06:13
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Bella0224

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
激素要在超净工作台里，利用0.22um的过滤器进行除菌过滤，你可以下在外面将激素粉末溶解好，然后再在超净工作台里进行过滤，需要购买过滤器和注射器，找一个也是灭菌的离心管之类的，看你自己啦，然后用1.5mlEP管进行分装，保存在-20度~

激素和抗生素都可以配置1000×的母液，就是把你的目的浓度扩大1000倍，加的时候枪头要用灭菌过的，按照相应体积比例缩小加就行了~

加激素要等到灭菌后的培养基室凉至不烫手，温和的时候就差不多了，我们一般就是40度左右，激素在高温下会降解
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17楼2013-04-03 15:03:22
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-02-16 10:39:34
baggio00009(金币+1): 2011-02-16 17:25:06
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:59:17
1.我们实验室一般都是加好后高温灭菌的
2.如需定量的话，将天平置于超净台紫外照射灭菌后，将培养器皿整体放入调零，定量初始细胞量
3关于书籍方面可以去你们的图书馆看看，我一般在我们图书馆能满足我的需求。
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2楼2011-02-16 08:45:32
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ziman2003

银虫 (小有名气)
★ ★
baggio00009(金币+1): 2011-02-16 17:24:58
baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:21
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-02-18 10:54:02
baggio00009(金币+1): 2011-02-22 17:59:09
您好！
我在研究生阶段做了大量的组培工作，主要是愈伤和诱导的过程。
首先，对于你说的激素的问题，所有的激素，包括生长素，细胞分裂素等等，都是需要0.22um的过滤器除菌过滤。然后待灭菌后的培养基室温凉至45度左右，加入激素。因为激素在高温下容易降解的。
其次，我没有做过细胞的悬浮培养，你可以找一些组织培养教材看看。好像本科的组织培养教材中就有描述，或者有关组培的实验指导技术。
希望对你有所帮助。
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3楼2011-02-16 16:38:15
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dacaoyuan5330

木虫 (小有名气)
baggio00009(金币+1): 2011-02-18 02:00:15
好像有本书 专门介绍怎样做细胞培养的 暂时忘记了 过后告诉你
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4楼2011-02-16 17:22:26
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