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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA 荧光定量
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA 荧光定量

请问大家做荧光定量的时候，是如何将RNA调解到相同的浓度的？？？

现在我们老师要求我们先测定RNA OD然后稀释成大致相同的浓度，再次测定OD，然后再次稀释成相同的浓度，因为中间增加了一个稀释的环节，又因为RNA很容易降解，所以想知道大家稀释的方法。


直接原始RNA溶液的OD值，利用算术方法将浓度稀释成统一的值，可以吗？
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1楼 2011-01-10 00:17:21
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-10 09:03:25
我没做个，但是实验室其它人做是用两部发，一开始稀释个大致浓度，然后测定OD值～～
反转第一链的时候，加入换算过等量的RNA作为模版进行反转，这也就没有问题了～
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2楼2011-01-10 08:58:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-10 09:03:36
用微量比色皿，测完浓度的RNA就扔了，不管他降不降解
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3楼2011-01-10 09:00:43
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pidou213

木虫 (正式写手)
reasonspare:只需要1ul，就足够了。产品明NanoDrop. 2011-01-12 07:29:41
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-10 09:00:43:
用微量比色皿，测完浓度的RNA就扔了，不管他降不降解

可是那样好可惜啊，浪费不起啊。我们一般一次也就100微升
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4楼2011-01-10 20:44:39
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-10 20:44:39:



可是那样好可惜啊，浪费不起啊。我们一般一次也就100微升

所以要用微量比色皿，100ul里边加2ul RNA就可以了
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5楼2011-01-11 08:25:21
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showcake2010

铜虫 (小有名气)

请问小鼠IL-8的基因序列（mRNA序列）或者ncbi上的NM序列号

reasonspare:请重新开帖，求助会更有效率 2011-01-12 07:32:24
请问各位大虾，如题，我在ncbi上找到了人的IL-8序列和NM号，
但是找不到小鼠的，想找到序列或NM号用来合成荧光定量PCR的引物。
ELISA检测试剂盒是有的，奇怪为什么序列找不到？
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6楼2011-01-11 14:19:19
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pidou213

木虫 (正式写手)
reasonspare:不是蒙，nanodrop，一次测样只需要1-2 ul, 然后根据你需要的浓度，进行浓缩和稀释 2011-01-12 07:31:38
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-11 08:25:21:



所以要用微量比色皿，100ul里边加2ul RNA就可以了

这样不停的蒙的话，恐怕不太好吧
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7楼2011-01-12 00:13:58
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
pidou213(金币+1):辛苦 2011-01-12 10:15:15
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-12 00:13:58:



这样不停的蒙的话，恐怕不太好吧

算我没说
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8楼2011-01-12 08:03:38
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2):鼓励交流 2011-01-12 10:04:06
通过OD值来进行稀释，具体操作起来非常麻烦，而且不准。
建议你通过荧光PCR的Ct值来进行比较，可靠性稍微好点。
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9楼2011-01-12 09:06:38
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-12 08:03:38:



算我没说

那个不太好吧

俺也没别的意思

只是讨论一下嘛
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10楼2011-01-12 10:14:37
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