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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【原创】刚才发现的一个做克隆时涂板的小窍门
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

[交流] 【原创】刚才发现的一个做克隆时涂板的小窍门 已有15人参与

各位做生物的都是常做克隆的，克隆中也就是以限制性内切酶和连接酶，切下来又连上去。然后就是转化大肠杆菌涂板。但经常发现菌落长的满板都是，尤其是蓝白斑和电转农杆菌的时候。满板的菌落不好挑取，而且还耽误了时间。

    我刚才发现了个窍门，是涂板时，4000rpm离心3分钟完毕后，以移液器将菌体沉淀悬浮，吸取4/5的菌液滴到平板的1/2部分，剩余的1/5加至平板的另外1/2部分。涂板时，先涂菌液少的那1/2，然后再涂菌液多的1/2部分。如此以来，像是一个菌液的浓度梯度，最后在抗生素板上长出来的菌落不管多还是少，都是可以继续下一步实验的。
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1楼 2011-01-09 15:24:34
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
小斑斑啊
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小木虫之有关部门负责人
2楼2011-01-09 15:26:26
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shourjruo

铜虫 (小有名气)
可以尝试做做
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当思考成为习惯，成功将不期而至。
3楼2011-01-09 15:28:31
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backsunboy
4楼2011-01-09 16:23:26
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yabing0324

金虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
嗯，说的是啊！
希望大家都向楼主学习，多给大家交流下自己的小诀窍！
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5楼2011-01-09 19:55:56
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chene

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做出经验、做出创造力来了
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穷则独善其身，达则兼济天下。
6楼2011-01-09 20:15:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+3):科研就是要有思想 2011-01-10 08:58:10
楼主涂板多的半边为多少微升？少的半边为多少微升？涂板要涂多久才干？平板直径是否9厘米？平板是否容易干？

我做的时候是涂3块，50、100、200微升各一块，直径9厘米的平板，绝对有单菌落。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-01-09 20:21:59
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602059625

金虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
谢谢分享
麻烦，根据经验随便涂一点就是了
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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
8楼2011-01-09 20:27:36
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵，

很好的小技巧，

可以试试
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
9楼2011-01-09 21:47:21
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原来那个实验室的时候，老板逼着我们用无菌玻璃珠晃。

现在这个实验室我学到了新招，平板都是放在4度好久的，失水了。根本不用涂布，直接吸取200ul在上面，然后注视着中心的液滴，旋转使其扩大，OK。不到扩大到平板大小的时候已经快干了。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2011-01-09 21:53:26
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