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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

[交流] 【原创】刚才发现的一个做克隆时涂板的小窍门 已有15人参与

各位做生物的都是常做克隆的,克隆中也就是以限制性内切酶和连接酶,切下来又连上去。然后就是转化大肠杆菌涂板。但经常发现菌落长的满板都是,尤其是蓝白斑和电转农杆菌的时候。满板的菌落不好挑取,而且还耽误了时间。

    我刚才发现了个窍门,是涂板时,4000rpm离心3分钟完毕后,以移液器将菌体沉淀悬浮,吸取4/5的菌液滴到平板的1/2部分,剩余的1/5加至平板的另外1/2部分。涂板时,先涂菌液少的那1/2,然后再涂菌液多的1/2部分。如此以来,像是一个菌液的浓度梯度,最后在抗生素板上长出来的菌落不管多还是少,都是可以继续下一步实验的。
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+3):科研就是要有思想 2011-01-10 08:58:10
楼主涂板多的半边为多少微升?少的半边为多少微升?涂板要涂多久才干?平板直径是否9厘米?平板是否容易干?

我做的时候是涂3块,50、100、200微升各一块,直径9厘米的平板,绝对有单菌落。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-01-09 20:21:59
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 12:02:03
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-09 21:53:26:
原来那个实验室的时候,老板逼着我们用无菌玻璃珠晃。

现在这个实验室我学到了新招,平板都是放在4度好久的,失水了。根本不用涂布,直接吸取200ul在上面,然后注视着中心的液滴,旋转使其扩大,OK。不到扩大到 ...

平板放在4度确实可以使得水分跑到培养皿的盖子上,使得培养基水分少一些,但是相应的也增加了染菌的危险性。放那么久,不是所有的微生物都不能在4度生长的,有的不休眠,再说4度冰箱也不总是4度,时间太长了就长大了,平板就不能用了,所以此招慎用。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
12楼2011-01-10 00:32:32
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