应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】xho1单酶切，总连不上(片段3K,载体5K)
51/1返回列表
查看: 2076  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

乱马123

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】xho1单酶切，总连不上(片段3K,载体5K) 已有6人参与

由于目的片段的限制，只能单酶切。
片段3K，载体5K,用NEB的T4连接酶，10ul体系中加1ul酶，载体：片段=1:10。
16度连接过夜。连过很多次，总是长出很多菌落（多为载体自连），挑菌做pcr,没有条带。
到底是哪里的问题，还请各位帮忙！先谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-07 11:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
9楼2012-06-19 16:31:49
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 9 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最爱花诗雨(金币+1):正解~ 2011-01-07 13:07:42
单酶切之后为何不做载体去磷酸化？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-01-07 11:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):鼓励交流。 2011-01-07 22:57:30
载体没有必要去磷酸化吧，你可以在体系里多加一些载体进去！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-01-07 13:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乱马123

新虫 (初入文坛)
谢谢各位了，貌似去磷酸化很麻烦的，
是否要改变片段和载体的摩尔比？片段多加一些，以增加和载体连接的几率
赞一下 回复此楼
6楼2011-01-07 18:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭