应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western 曝光actin正常，但是样品却曝不出来
51/1返回列表
查看: 3574  |  回复: 37
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】western 曝光actin正常，但是样品却曝不出来

western 曝光actin正常，但是样品却曝不出来，样品整张膜都发光，我试过一抗的浓度从1:500到1:3000都是这种情况，封闭时间最长的时候封闭过夜，却还是整张膜都发光（一抗二抗都用TBST洗三遍每遍15分钟），请问各位是哪里出的问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-06 21:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zx1984 at 2011-01-12 12:31:35:

那二抗就应该没问题，看看一抗孵育过夜试试，不行就换一抗，再不行就是样品可能有问题，没办法，western一旦这样就只能一步步的排除原因。

我现在除了一抗没换其他的都试过了，那看来真的是一抗有问题，哎，这是我最不想见到的
赞一下 回复此楼
26楼2011-01-12 13:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 38 个回答

feng__

金虫 (著名写手)
★
huangwensh(金币+1): 2011-01-07 10:19:19
最爱花诗雨(金币+1):good 2011-01-07 10:23:09
是不是样品有问题，或者样品处理过程中有问题

再就是抗体了

一抗我们做一般都是1；400

二抗1；4000
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-07 10:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by feng__ at 2011-01-07 10:05:27:
是不是样品有问题，或者样品处理过程中有问题

再就是抗体了

一抗我们做一般都是1；400

二抗1；4000

那我的actin曝出来都很正常，样品是不是不该有问题啊？
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-07 10:18:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2):good 2011-01-07 16:40:31
huangwensh(金币+3): 2011-01-07 16:58:42
引用回帖:
Originally posted by huangwensh at 2011-01-07 10:18:59:



那我的actin曝出来都很正常，样品是不是不该有问题啊？

恩，考虑下抗体的问题，再多做几次，有的时候是这样的，当时我跟同学在一块胶上跑样品，我的结果就很好，他的就出不来，后来再做就又出来了，也不知道到底是哪里出问题了，还有，你的样品是什么啊？细胞表达的蛋白吗？如果是的话，分清楚是胞外表达还是胞内，核内，如果是后者，那actin表达，你的样品不表达也是正常的，要破碎细胞壁，细胞核！呵呵，自己的一点小经验
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-07 10:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 38 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭