应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 前沿资讯 » 【求助】多孔材料中细胞全液的提取方法
51/1返回列表
查看: 1237  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

王庭

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助】多孔材料中细胞全液的提取方法

我主要是做生物材料偏颇于生物检测这块的。为了将材料上的细胞和培养瓶中的细胞生长状况进行大分子方面的对比，就需要得到全细胞提取液以及RNA等。但是我在多孔材料中培养的细胞，粘附性太好了，导致用胰酶很难清洗下来，又不能消化太久，所以也就很难得到全细胞提取液，我尝试在材料中破碎细胞直接进行全液提取，可是结果也不太好。哪位正在做，或者头脑极为强大的大侠给出出主意啊，感激涕零哦~~~Sample Text
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-27 20:09:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dj04164

木虫 (正式写手)
★ ★
americanyk(金币+2):谢谢回帖交流 2011-01-13 16:46:19
王庭(金币+2): 现在打算换方法了，查了很多文献，发现少有三维多孔支架材料提取全细胞液WB来检查蛋白的。开始觉得是对方没有采用分子生物学手段检测材料性能，现在看来这大概是个瓶颈，难于突破吧？！所以，换个地方打井了~呵呵，谢谢你 2011-03-09 15:35:28
一般的方法种植细胞，不会在孔中涨的很深吧，不知孔有多大。能想到的办法，可以用缓冲液多洗两遍再trypsin，trypsin用含edta的，并且最好是新的。另外，medium里的成分蛋白的部分主要是bsa，一般对WB干扰不大。
实在弄不下来是不是可以考虑换个细胞系，或者缩短培养时间。有的细胞贴壁很牢，而且随时间延长更牢。
cell scraper 试过没？连带表面样品一同刮掉。加裂解液后离心去除。
如果在样品上裂解就难免蛋白浓度过低，可以试试看蛋白纯化之后再wb。
祝好运
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-01-13 09:29:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

王庭

木虫 (著名写手)
请大家多多帮忙啊，给点建议，做了近两个月了，结果一直不好，头大啊~
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-27 20:15:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
★
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论！ 2011-01-08 23:50:34
王庭(金币+2):谢谢哦 2011-01-12 20:12:01
为什么不试一下将细胞-材料放在液氮里面研磨，然后制成悬液，反复冻融裂解细胞，最后离心收集上清？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-08 21:46:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
★
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论！ 2011-01-08 23:50:40
王庭(金币+2):谢谢了哦 2011-01-12 20:16:02
用细胞裂解液试试，把细胞全部裂解。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-08 21:55:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭