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王庭

木虫 (著名写手)

应助: 12 (小学生)
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在线: 535.9小时
虫号: 966406

[交流] 【求助】多孔材料中细胞全液的提取方法

我主要是做生物材料偏颇于生物检测这块的。为了将材料上的细胞和培养瓶中的细胞生长状况进行大分子方面的对比，就需要得到全细胞提取液以及RNA等。但是我在多孔材料中培养的细胞，粘附性太好了，导致用胰酶很难清洗下来，又不能消化太久，所以也就很难得到全细胞提取液，我尝试在材料中破碎细胞直接进行全液提取，可是结果也不太好。哪位正在做，或者头脑极为强大的大侠给出出主意啊，感激涕零哦~~~Sample Text

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1楼 2010-12-27 20:09:55

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dj04164

木虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
贵宾: 0.1
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虫号: 687713

★ ★
americanyk(金币+2):谢谢回帖交流 2011-01-13 16:46:19
王庭(金币+2): 现在打算换方法了，查了很多文献，发现少有三维多孔支架材料提取全细胞液WB来检查蛋白的。开始觉得是对方没有采用分子生物学手段检测材料性能，现在看来这大概是个瓶颈，难于突破吧？！所以，换个地方打井了~呵呵，谢谢你 2011-03-09 15:35:28

一般的方法种植细胞，不会在孔中涨的很深吧，不知孔有多大。能想到的办法，可以用缓冲液多洗两遍再trypsin，trypsin用含edta的，并且最好是新的。另外，medium里的成分蛋白的部分主要是bsa，一般对WB干扰不大。
实在弄不下来是不是可以考虑换个细胞系，或者缩短培养时间。有的细胞贴壁很牢，而且随时间延长更牢。
cell scraper 试过没？连带表面样品一同刮掉。加裂解液后离心去除。
如果在样品上裂解就难免蛋白浓度过低，可以试试看蛋白纯化之后再wb。
祝好运