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peifeinini铜虫 (正式写手)
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肝实质细胞提取中DNase的作用
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新手上路，盼过来人指点一二。 打算提取肝实质细胞，paper中有提到切除后的肝脏泡在有胶原酶 IV和DNase的灌注液中弄碎，37度下摇10 min，再过滤，离心…… 想问的是，在这里DNase的具体作用是什么？不用它的话影响大不大？因为现在暂时没有这个东西，而我也看到很多paper好像也没有用它，所以想干脆就不加了。大家有何意见和建议吗？非常感谢。 |
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 分子生化实验经验积累 |
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myprayer
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DNase 脱氧核糖核酸酶（亦称DNase） 由牛胰制备的脱氧核糖核酸;脱氧核糖核酸酶;DNA酶;去氧核糖核酸酶;胰道酶;胰克氧核糖核酸酶;除氧细胞核酸酶（牛胰）;去氧细胞核酸酶； 物化性质：单位定义：37℃，50μl缓冲液（40mM Tris-HCl （pH 7.9 at 25℃）、10mM NaCl、 6mM MgCl2、10mM CaCl2）中，每十分钟完全降解1μg DNA的酶量为1单位。 类白色冻干粉，易溶于水，微溶于30%乙醇和丙酮，最适pH值7.8。水溶液中加入5mmol/L Ca2+或二异丙基氟磷酸（DFP）可增加其稳定性。抑制剂有EDTA和十二烷基磺酸钠；激活剂为二价金属离子，Mg2+与Ca2+合用可得到最佳效果。1%水溶液在280nm处吸收系数为11.1。限制消化的平均链长为四核苷酸，酶反应：脱氧核糖核酸═二核苷酸-5'-磷酸+寡聚核苷酸-5'-磷酸。脱氧核糖核酸酶（DNase） 主要用途：用于降解RNA中的DNA，纯化RNA；研究DNA与蛋白质的相互作用。  用于生化研究，临床上常用作祛痰药，也可局部用于脓肿、血肿以及鞘内注射治疗脑膜炎。 储存条件：−20℃GOY0414 LPM琼脂 单增李氏菌的选择性分离 250g Amresco GOY0415 Half Fraser培养基 李氏菌的增菌培养 250g Amresco GOY0416 SIM动力培养基/SIM培养基 李氏菌动力观察，H抗原位相变异试验；硫化氢、动力、吲哚试验 250g Amresco GOY0417 李氏菌选择性培养基基础/改良McBride琼脂培养基/MMA 单增李氏菌选择性分离 250g Amresco 苄酯对甲苯磺酸盐N-乙酰-L-酪氨酸L-酪氨酸叔丁酯L-酪氨酸苄酯对甲苯磺酸盐Thr-OtBu·HClL-苏氨酸苄酯半草酸盐5-氨基酮戊酸甲酯盐酸盐L-丝氨酸甲酯盐酸盐D-苯芴甲氧羰基-N-epsilon-叔丁氧羰基-L-赖氨酸Fmoc-L-亮氨酸Fmoc-L-异亮氨酸N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-组氨赖氨酸N-alpha-酰门冬氨酸-4-叔丁基酯L-天冬氨酸-4-苄酯L-精氨酸乙酯二盐酸盐β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐D-丙氨酸叔丁酯盐酸盐L-丙氨酸叔丁酯盐酸盐L-丙氨酸乙酯盐酸盐D-苯丙氨酸苄酯对甲苯磺酸盐L-丙氨酸苄酯对GOY0252 N-乙酰-DL-蛋氨酸/N-乙酰-DL-甲硫氨酸/N-乙酰基-DL-甲硫氨酸/N-Acetyl-DL-Methionine BR，脱氧核糖核酸酶（DNase） RQ1 RNase-Free DNase from Bovine pancreas.99丁基-L-丝氨酸Fmoc-O-苄基-L-丝氨酸N-芴甲氧羰基-D-丝氨酸Fmoc-L-丝氨酸FMOC-D-苯甘氨酸Fmoc-L-苯基甘氨酸Fmoc-L-羟脯氨酸Fmoc-D-脯氨酸Fm GOY0418 EB增菌肉汤培养基基础/EB增菌液 单核细胞增生李氏特菌增菌 250g Amresco GOY0419 Fraser培养基 李氏菌的增菌培养 250g Amresco GOY0420 UVM培养基 李氏菌的增菌培养 250g Amresco GOY0421 LM-137琼脂 膜滤法单增李氏菌的选择性分离 250g Amresco GOY0422 改良缓冲蛋白胨水/MBP 李氏菌的增殖 250g Amresco GOY0423 枸橼酸盐培养基 大肠杆菌和产气杆菌的鉴别 250g Amresco GOY0424 Christensen尿素琼脂 肠杆菌、需氧放线菌、链球菌及非发酵培养革兰氏阴性杆菌等尿素酶的活性鉴定 250g Amresco GOY0425 尿素酶琼脂基础/尿素琼脂培养基基础 细菌脲酶检测，肠杆菌鉴别 250g Amresco |
2楼2013-04-19 08:39:45
3楼2013-04-19 11:33:35
peifeinini
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4楼2013-04-20 13:32:54
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噢，我们实验室提的也没有用DNase。取肝细胞的关键主要是胶原酶在体内作用的是否充分，如果充分的话取下来之后非常好弄碎。个人感觉，弄碎时应该无所谓胶原酶和DNase。 |
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peifeinini5楼2013-04-20 23:02:03
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| 单纯提出肝实质细胞一般不用加DNase呀，加上DNase可能是因为肝实质细胞分离过程中有些细胞破碎后游离出DNA，DNase能够切割DNA，有利于后期除去DNA污染，多少有些好处。另外，我觉得肝脏泡在有胶原酶 IV外，还应该加些胰蛋白酶也有利于消除细胞之间的细胞间质成分而使得肝细胞容易彼此分离。 |
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6楼2013-04-21 12:35:50
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