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peifeinini铜虫 (正式写手)
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[求助]
肝实质细胞提取中DNase的作用
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新手上路，盼过来人指点一二。 打算提取肝实质细胞，paper中有提到切除后的肝脏泡在有胶原酶 IV和DNase的灌注液中弄碎，37度下摇10 min，再过滤，离心…… 想问的是，在这里DNase的具体作用是什么？不用它的话影响大不大？因为现在暂时没有这个东西，而我也看到很多paper好像也没有用它，所以想干脆就不加了。大家有何意见和建议吗？非常感谢。 |
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3楼2013-04-19 11:33:35
myprayer
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【答案】应助回帖
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DNase 脱氧核糖核酸酶（亦称DNase） 由牛胰制备的脱氧核糖核酸;脱氧核糖核酸酶;DNA酶;去氧核糖核酸酶;胰道酶;胰克氧核糖核酸酶;除氧细胞核酸酶（牛胰）;去氧细胞核酸酶； 物化性质：单位定义：37℃，50μl缓冲液（40mM Tris-HCl （pH 7.9 at 25℃）、10mM NaCl、 6mM MgCl2、10mM CaCl2）中，每十分钟完全降解1μg DNA的酶量为1单位。 类白色冻干粉，易溶于水，微溶于30%乙醇和丙酮，最适pH值7.8。水溶液中加入5mmol/L Ca2+或二异丙基氟磷酸（DFP）可增加其稳定性。抑制剂有EDTA和十二烷基磺酸钠；激活剂为二价金属离子，Mg2+与Ca2+合用可得到最佳效果。1%水溶液在280nm处吸收系数为11.1。限制消化的平均链长为四核苷酸，酶反应：脱氧核糖核酸═二核苷酸-5'-磷酸+寡聚核苷酸-5'-磷酸。脱氧核糖核酸酶（DNase） 主要用途：用于降解RNA中的DNA，纯化RNA；研究DNA与蛋白质的相互作用。  用于生化研究，临床上常用作祛痰药，也可局部用于脓肿、血肿以及鞘内注射治疗脑膜炎。 储存条件：−20℃GOY0414 LPM琼脂 单增李氏菌的选择性分离 250g Amresco GOY0415 Half Fraser培养基 李氏菌的增菌培养 250g Amresco GOY0416 SIM动力培养基/SIM培养基 李氏菌动力观察，H抗原位相变异试验；硫化氢、动力、吲哚试验 250g Amresco GOY0417 李氏菌选择性培养基基础/改良McBride琼脂培养基/MMA 单增李氏菌选择性分离 250g Amresco 苄酯对甲苯磺酸盐N-乙酰-L-酪氨酸L-酪氨酸叔丁酯L-酪氨酸苄酯对甲苯磺酸盐Thr-OtBu·HClL-苏氨酸苄酯半草酸盐5-氨基酮戊酸甲酯盐酸盐L-丝氨酸甲酯盐酸盐D-苯芴甲氧羰基-N-epsilon-叔丁氧羰基-L-赖氨酸Fmoc-L-亮氨酸Fmoc-L-异亮氨酸N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-组氨赖氨酸N-alpha-酰门冬氨酸-4-叔丁基酯L-天冬氨酸-4-苄酯L-精氨酸乙酯二盐酸盐β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐D-丙氨酸叔丁酯盐酸盐L-丙氨酸叔丁酯盐酸盐L-丙氨酸乙酯盐酸盐D-苯丙氨酸苄酯对甲苯磺酸盐L-丙氨酸苄酯对GOY0252 N-乙酰-DL-蛋氨酸/N-乙酰-DL-甲硫氨酸/N-乙酰基-DL-甲硫氨酸/N-Acetyl-DL-Methionine BR，脱氧核糖核酸酶（DNase） RQ1 RNase-Free DNase from Bovine pancreas.99丁基-L-丝氨酸Fmoc-O-苄基-L-丝氨酸N-芴甲氧羰基-D-丝氨酸Fmoc-L-丝氨酸FMOC-D-苯甘氨酸Fmoc-L-苯基甘氨酸Fmoc-L-羟脯氨酸Fmoc-D-脯氨酸Fm GOY0418 EB增菌肉汤培养基基础/EB增菌液 单核细胞增生李氏特菌增菌 250g Amresco GOY0419 Fraser培养基 李氏菌的增菌培养 250g Amresco GOY0420 UVM培养基 李氏菌的增菌培养 250g Amresco GOY0421 LM-137琼脂 膜滤法单增李氏菌的选择性分离 250g Amresco GOY0422 改良缓冲蛋白胨水/MBP 李氏菌的增殖 250g Amresco GOY0423 枸橼酸盐培养基 大肠杆菌和产气杆菌的鉴别 250g Amresco GOY0424 Christensen尿素琼脂 肠杆菌、需氧放线菌、链球菌及非发酵培养革兰氏阴性杆菌等尿素酶的活性鉴定 250g Amresco GOY0425 尿素酶琼脂基础/尿素琼脂培养基基础 细菌脲酶检测，肠杆菌鉴别 250g Amresco |
2楼2013-04-19 08:39:45
peifeinini
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4楼2013-04-20 13:32:54
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噢，我们实验室提的也没有用DNase。取肝细胞的关键主要是胶原酶在体内作用的是否充分，如果充分的话取下来之后非常好弄碎。个人感觉，弄碎时应该无所谓胶原酶和DNase。 |
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peifeinini5楼2013-04-20 23:02:03