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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR新技术求助
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR新技术求助 已有7人参与

急求简便易用的PCR新技术。昨晚被指导老师一通狂批，小虫欲哭无泪。说是指导，实际是对这块无暇顾及，如我一般，也没有基础，实验室启用后也极少来，可怜小虫是从实验室开建一路跌跌撞撞，好不容易开始自己的课题。要命的是，实验室就我一个，说话的人都没一个，遇到问题就如这样上网想大家请教。本就是新接触的领域，偏偏又给指定了一个极难的品种，既然是在此向大家求助了，小虫就说说自己的课题方向吧。大学及硕士理论都是药物分析（化学），理论课结束后接受安排到现在的单位协助建立分子实验室，种种原因，历时悠久，轮到品种选定，开始摸索试验条件，时间已然来不及了，延期，目前小虫已在延期中哈。
哦，说到方向，大了来说是研究分子生物学技术在中药鉴定中应用的可行性。具体到品种就是虫草属了。小虫目前做到的就只是对其中的正品和两种伪品进行特异PCR鉴定。什么巢氏之类的，试了一下，空白干扰严重，也不知道相关文献怎么做到的。当然实验内容还有其他挺多的。我们的最终目标就是要将这几个种用分子生物学手段加以区分。
目前实验室具备的条件能进行的就是PCR，普通电泳，连接转化。
样品方面测得了这几个种的ITS序列（有的还需要大量确证），就这样的情况大家能给小虫点建议吗？昨天被批说没有新技术应用，怎么可能通过。本来还想看看酶切结果会不会有差异，这下彻底玩完，这么老的技术，还不给鄙视死了。大家有简单可行的新技术介绍给小虫吗？感激涕零啊。
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1楼 2010-12-27 08:38:51
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-12-27 19:55:23
PCR、酶切这些基本操作，分子生物学的基础啊，是不会过时的
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2楼2010-12-27 08:43:06
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-27 08:43:06:
PCR、酶切这些基本操作，分子生物学的基础啊，是不会过时的

不是过时，可能是觉得没有新意，论文没有亮点吧。当然我只是小硕。不过之前看到一篇协和的博士论文让我很是诧异，人家做的也不多。就一个RFLP，一个多重PCR，鉴别八种，我真想把这论文给她看看，是不是也狠狠鄙视人家
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3楼2010-12-27 09:12:42
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★ ★
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silicare(金币+1):有道理 2010-12-27 11:42:24
新意不是在技术上的，是你论文的立题，要真想新技术，就测序咯特别是基因组测，这个最近很热，铺天盖地的广告！

[ Last edited by aga0110125 on 2010-12-27 at 09:53 ]
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4楼2010-12-27 09:51:18
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jerry110

新虫 (小有名气)
赞成楼上的观点
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5楼2010-12-27 09:57:34
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2010-12-27 09:51:18:
新意不是在技术上的，是你论文的立题，要真想新技术，就测序咯特别是基因组测，这个最近很热，铺天盖地的广告！

[ Last edited by aga0110125 on 2010-12-27 at 09:53 ]

是啊，我们只是应用性的，也还只是探索阶段，况且我也就一两个月时间，倒是脸延期的机会都给用没了，真是要了小命啊
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6楼2010-12-27 10:01:06
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sunteam02

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3):鼓励交流！ 2010-12-27 19:55:31
定量PCR的新技术：
real-timeimmuno-PCR
高分辨率熔解曲线（HRM）进行SNP基因分型
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性（SNP）
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7楼2010-12-27 12:53:42
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sunteam02 at 2010-12-27 12:53:42:
定量PCR的新技术：
real-timeimmuno-PCR
高分辨率熔解曲线（HRM）进行SNP基因分型
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性（SNP）

非常感谢。Real-time PCR不知道可不可行，其他对我们可能复杂了点。
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8楼2010-12-27 12:59:35
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hailiang1029

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-12-27 19:55:40
我觉得吧，你的东西不过时，只是亮点不是很亮，毕竟你的东西没人做过，这就是最大的亮点啊，最好的时在最后电泳的时候上样一个新的仪器，出来的图比较好看而且灵敏度高一点，直接跑电泳拍照的就逊色多了，比如用毛细管电泳仪，或者aglient 2100等等，出来的图很漂亮，做RFLP相当合适
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9楼2010-12-27 15:40:03
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hailiang1029 at 2010-12-27 15:40:03:
我觉得吧，你的东西不过时，只是亮点不是很亮，毕竟你的东西没人做过，这就是最大的亮点啊，最好的时在最后电泳的时候上样一个新的仪器，出来的图比较好看而且灵敏度高一点，直接跑电泳拍照的就逊色多了，比如用毛 ...

谢谢你的鼓励。最后的成像系统还真是个问题，现在用的还是十年前的syngene。最近倒是会到一台ABI fast7500，本以为可以用上作为一个亮点的，老师说别指着它，还不定怎么样呢，还得培训熟悉啥的，谁知道来不来得及。彻底晕倒
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10楼2010-12-27 16:02:10
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