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liuzen1986

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】请教霉菌生长曲线测定方法

我要测定霉菌的生长曲线，但是细菌那种测定方法好象不行，请高人指点，

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1楼 2010-12-16 20:51:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+10, EPI+1): 热心鼓励 2011-07-02 09:50:07

这张帖子被引用作为另一个帖子所提问题的解答，我好奇地进来看了一下，觉得这张帖子的问题还是没有解决，虽然帖子是老了一点，但是问题解决了却是好事。

首先讨论测定吸光度的问题。我培养过曲霉属（包括黑曲霉、黄曲霉、米曲霉、塔宾曲霉、棘孢曲霉、黄柄曲霉、亮白曲霉等）、青霉属（包括草酸青霉、嗜松青霉等），枝状枝孢霉种，根霉属，木霉属，还有很多没有鉴定过的真菌，超过一千株，发现除非是污染了细菌，不然真菌在液体培养（180rpm）时菌丝长了之后都会相互纠结成球或块状，所以测定OD值不能反映真菌的生长时期。假如培养液离心之后测定OD值，那么没有菌体存在了；假如不离心，那么取菌体不能反应培养液中菌体的含量，而且如果菌体恰好挡住了光栅投射点，那么就完全吸光，没有任何光透过，引起误差。所以就别想着测定OD值了，细菌可以，真菌不适合。

再来看看测定菌丝干重的问题。首先应该肯定这个方法，因为这个方法已经把菌丝考虑进去了，大方向没有错，但是细节却很需要注意，因为取样量要真实反映菌丝的含量，而且还要保持培养液体系的完整。第一，取样量要真实反映菌丝的含量存在困难，因为真菌是有菌丝的，菌丝一旦长了就容易纠结在一起成块或者球状，需要摇均匀才能取样，但是怎样才算均匀呢？这是不确定因素。第二，保持培养液体系的完整也存在困难，因为取样的过程中需要无菌操作，这个取样品过程是否能保持无菌操作，不让细菌长起来，存在隐患；第二，一瓶培养基取样多次之后还剩下多少毫升？会不会开始的时候是100毫升，七天之后只剩下50毫升？还有，在摇床或者发酵罐中，空气的流动也会带走水分的，会不会开始的时候是100毫升，七天之后取样10次每次5毫升，最后只剩下30毫升？

我有个办法可以避免上面提到的这些问题，那就是将这个真菌制取孢子悬浮液（浓度不在此处讨论），以相同的接种量接种到足够数量的相同体积的液体培养基中，在同一条件下培养，在每个取样时间点取出3瓶培养基用布氏漏斗抽滤，在烘箱中50-60度烘干至恒重，称重。这样做虽然工作量大了些，但排除了多次取样操作带来的细菌污染的隐患，液体体积变化的变数，直接反映了菌丝生长的时期，数据可信。