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daqwu

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌不同时期培养基成分测定

小弟最近投一篇文章,研究不同温度下假单胞菌基因表达变化,审稿人提出要排除培养基成分的影响,让我测一下细菌培养基不同处理中(摇瓶培养,测的是对数后期)的中主要成分会不会存在差异,想问下各位该用什么方法测?是不是要测还原糖,氨基N元素等含量?可有具体方法,有没有单位可以帮助检测的?十分感谢!
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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daqwu: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢指导! 2012-07-03 09:09:05
你用的什么质粒?什么培养基呢?如果是LB的话,就测个N吧,有试剂盒的。其实我觉得这个参数对你的实验意义不大,最好用对照实验证明培养基成分对表达没有影响,或者有影响,就可以了
相信自己
2楼2012-07-03 08:27:47
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3楼2012-07-03 08:55:37
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daqwu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by l68266152 at 2012-07-03 08:27:47
你用的什么质粒?什么培养基呢?如果是LB的话,就测个N吧,有试剂盒的。其实我觉得这个参数对你的实验意义不大,最好用对照实验证明培养基成分对表达没有影响,或者有影响,就可以了

我们是分析的就是野生型菌,没有质粒,培养基是LB。在不同温度条件下,相同生长状态的细菌(OD5-6),审稿人说得排除两个温度下的培养基成分的差异造成的影响,所以要测下,只测个N可以吗?对照应该怎么设置?
4楼2012-07-03 09:27:59
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xiaoqing518

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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daqwu: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-03 19:40:36
这个还是得看检测的物质对菌种的影响。要不怎么检测?培养基中的成分那么复杂,检测不过来啊
先根据文献,确定那些物质可能有影响,然后再去做
5楼2012-07-03 11:13:23
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north_coco887

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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daqwu: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-03 19:40:08
测个总N,测个残糖就可以吧(蛋白胨酵母粉里是有残糖的)?温差不大的话,可能真没大有必要。
6楼2012-07-03 11:58:06
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daqwu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by north_coco887 at 2012-07-03 11:58:06
测个总N,测个残糖就可以吧(蛋白胨酵母粉里是有残糖的)?温差不大的话,可能真没大有必要。

温度相差9度,我们也是觉得没有必要。那请问测定总N和残糖的方法是什么?
7楼2012-07-03 19:43:35
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north_coco887

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
daqwu: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-04 16:41:44
引用回帖:
7楼: Originally posted by daqwu at 2012-07-03 19:43:35
温度相差9度,我们也是觉得没有必要。那请问测定总N和残糖的方法是什么?...

测总氮可以凯氏定氮哈,c的记不清了,好像是碳谱。北大那边有个分析中心,你可以打电话问下,需要用什么仪器测,不贵,比我们学校服务好很多,嘿嘿。
8楼2012-07-04 16:13:06
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swnz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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daqwu: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-04 22:03:27
感觉审稿人有点过分。不过,楼主要有有说服力的对照才行,既然是考察不同温度下菌的表达的变化,如果是测定产物的话,一方面要测定表达产物是怎么变化的,另一方面,应该有直接相关的酶的活性的变化情况作为支撑。楼主看有没有酶学的支撑数据,如果有的话,先给审稿人交流一下看怎么样。
跟着感觉走
9楼2012-07-04 20:01:33
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