| 查看: 2650 | 回复: 14 | |||
[交流]
【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法
|
|||
|
各位达人，请教问题如下： 化合物A在WT菌株中的代谢途径是A->B->C. 在化学诱变株Mut中B->C的相关gene被阻断，有可能是调节gene，也有可能是功能gene。 其中化合物ABC已知，但只有A能买得到。 A->B的gene已知，B->C的功能gene未知。 WT菌株基因组未测序~（貌似花钱比较多） 请问有什么好的方法，克隆B-C的功能gene呢？ 方法原理是什么？实验难度如何？可行性有多高？经费需求多少？ 小弟金币不多，倾情奉献~  |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有93人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 宏基因组学技术在识别复杂环境样品中微生物的结构组成及功能中的应用
已经有5人回复
- 在乳酸菌中克隆基因用什么载体？
已经有8人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】如何调取未知基因
已经有7人回复
- 【求助/交流】非大肠杆菌基因组的复制原点要如何克隆呀？？
已经有4人回复
- 微生物学考研资料1(沈萍版同步）免币分享
已经有67人回复
|
参考文献给你，呵呵。有专门建库的试剂盒，不过比较昂贵，其实建那么小的一个库用不着这样的kit。自己找一个粘粒载体就OK了。 这个是我当初做宏基因组文库的时候参考过的一个nature protocol，建库的过程很详细，适合新手。 Construction of soil environmental DNA cosmid libraries and screening for clones that produce biologically active small molecules 全文链接： http://ryu.jgi-psf.org/general/protocols/HMW_eDNA.pdf |
12楼2010-12-13 22:27:06
2楼2010-12-13 11:48:59
3楼2010-12-13 20:38:24
4楼2010-12-13 20:53:28
5楼2010-12-13 21:14:49
6楼2010-12-13 21:43:56
7楼2010-12-13 21:49:19
8楼2010-12-13 21:55:15
9楼2010-12-13 22:02:56
10楼2010-12-13 22:10:45
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+10):谢谢您的回复~~~ 2010-12-14 21:25:05
scelab(金币+10):谢谢您的回复~~~ 2010-12-14 21:25:05
|
波长和颜色之一不一样都是可行的，呵呵。载体不存在问题，有的质粒都可以容纳20kb的（最好用粘粒，这个容量稳定），强烈建议不要用Sau3AI，这个酶太强了。我当初摸索条件太辛苦了。 我的一点经验是，载体最好采用平末端的限制性内切酶酶切，然后将你的DNA片段用常用的BamHI、EcoRI等酶酶切，然后平末端化，连接。或者更简单点就是用机械的方法使得DNA片段破碎，然后回收20kb左右的，平端化，连接。实在不想这么干的话，DNA及质粒都可以粘性末端酶切，这时候要控制好DNA部分酶切的时间，如果切割过于完全的话，可能你的目的基因会切断，一般这样的做法意味着你可能需要筛选更多的克隆。 [ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-13 at 22:21 ] |
11楼2010-12-13 22:17:52
13楼2010-12-13 22:28:31
★ ★ ★
scelab(金币+3):谢谢交流 2010-12-14 21:25:16
scelab(金币+3):谢谢交流 2010-12-14 21:25:16
|
1. Subtractive hybridization is a method to detect the differentially expressed gene(s) rather than the genomic DNA sequence insertion or deletion. I haven't carried out this technique, so I do not have much experience on it. 2. As to Microarray, if you don't have the microarray of the very species, I think you can try using those of the nearest relative species. Of cause, in this case, I think it is hard to do Microarray. 个人观点，欢迎拍砖，呵呵！  [ Last edited by 香菱儿 on 2010-12-14 at 12:54 ] |
14楼2010-12-14 12:45:21
15楼2010-12-14 12:55:11
