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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法
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未曾走过的路

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法

各位达人，请教问题如下：

化合物A在WT菌株中的代谢途径是A->B->C.
在化学诱变株Mut中B->C的相关gene被阻断，有可能是调节gene，也有可能是功能gene。

其中化合物ABC已知，但只有A能买得到。
A->B的gene已知，B->C的功能gene未知。
WT菌株基因组未测序~（貌似花钱比较多）

请问有什么好的方法，克隆B-C的功能gene呢？
方法原理是什么？实验难度如何？可行性有多高？经费需求多少？

小弟金币不多，倾情奉献~
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1楼2010-12-13 11:20:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流 2010-12-13 21:15:08
Subtractive hybridization, or Microarray
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4楼2010-12-13 20:53:28
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
scelab(金币+3):谢谢交流 2010-12-14 21:25:16
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-12-13 21:14:49:
请教

这两种方法是否是基于已知的genome全序列，或者部分DNA序列作为探针呢？

Subtractive hybridization，对于染色体DNA，如果突变株仅仅是失活，没有表达而已，而不是DNA缺失，这种情况怎么理解呢？
Mic ...

1. Subtractive hybridization is a method to detect the differentially expressed gene(s) rather than the genomic DNA sequence insertion or deletion.  
I haven't carried out this technique, so I do not have much experience on it.

2. As to Microarray, if you don't have the microarray of the very species, I think you can try using those of the nearest relative species. Of cause, in this case, I think it is hard to do Microarray.

个人观点，欢迎拍砖，呵呵！

[ Last edited by 香菱儿 on 2010-12-14 at 12:54 ]
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14楼2010-12-14 12:45:21
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