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未曾走过的路

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法

各位达人，请教问题如下：

化合物A在WT菌株中的代谢途径是A->B->C.
在化学诱变株Mut中B->C的相关gene被阻断，有可能是调节gene，也有可能是功能gene。

其中化合物ABC已知，但只有A能买得到。
A->B的gene已知，B->C的功能gene未知。
WT菌株基因组未测序~（貌似花钱比较多）

请问有什么好的方法，克隆B-C的功能gene呢？
方法原理是什么？实验难度如何？可行性有多高？经费需求多少？

小弟金币不多，倾情奉献~

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1楼2010-12-13 11:20:48

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

未曾走过的路(金币+5):高人 2010-12-13 22:06:09

引用回帖:

Originally posted by 未曾走过的路 at 2010-12-13 21:55:15:

如果底物能通过简单的分光光度计方法来分析，那是在上面各位提到的简单的方法不行------这句怎么理解呢，我的底物ABC都可以用紫外检测到，那上面的方法行还是不行呢？
genome library，粘粒库，是做DNA的库吗？ ...

打错了，我是说上面几位提到的方法比较简单，但是如果这些方法不奏效的话，采用genome library的方法也不失为一种有效可行的方法。

底物ABC的紫外检测时候的波长及显色反应不一样吧？如果一样就不行了。

是做DNA的库，提取基因组DNA，然后建库，挑克隆，用96孔板培养克隆，加底物B反应，显色。看哪个能有C的显色反应，然后可以亚克隆，或者20kb左右的片段直接测序。